RNA琼脂糖凝胶试剂配制方法及操作流程

琼脂糖凝胶的配制是分子实验室比较基本的操作。网上也有很多人总结文章。下面是上海金畔生物科技有限公司实验室总结的一篇琼脂糖凝胶配置的步骤和注意事项。

材料、试剂及器具
1、 材料
总rna提取物。
2、 试剂
(1)0.1%DEPC水：200ml双蒸去离子水加0.2mlDEPC焦炭酸、二乙酯混匀，室温放置过夜，高压灭菌。
(2)10x电泳缓冲液。
吗啉代丙烷磺酸(MOPS) 0.4mol/L(pH 7.0)
NaAc 0.1mol/L
乙二胺四乙酸(EDTA) 10mmol/L
(3)50mL变性琼脂糖凝胶(1%)
(4)10x电泳缓冲液 5 mL
琼脂糖 0.5 g
0.1%DEPC水 36.5 mL
加热溶解，稍冷却，加入8.5 mL 37%甲醛。
(5)上样缓冲液：50%，1mmmol/LEDTA，0.4% 溴酚兰，0.4%二甲苯蓝。
(6)甲酰胺(去离子)。
3、器具
(1)电泳系统
(2)紫外透视仪
RNA琼脂糖凝胶电泳实验原理、试剂配制方法及操作流程
四、操作步骤
1、 将制胶用具用70%乙醇冲洗一遍，晾干备用。
2、 制胶：
称取0.5g琼脂糖粉末，加入放有36.5mL的DEPC水的锥形瓶中，加热使琼脂糖完全溶解。稍冷却后加入5mL的10x电泳缓冲液、8.5mL的甲醛。然后在胶槽中灌制凝胶，插好梳子，水平放置待凝固后使用。
3、 加样：
在一个洁净的小离心管中混合以下试剂：电泳缓冲液(10x)2μl、甲醛3.5mL、甲酰胺10mL、RNA样品3.5μl。混匀，置60℃保温10min，冰上速冷。加入3μl的上样缓冲液混匀，取适量加样于凝胶点样孔内。同时点RNA标准样品。
4、 电泳：
打开电泳仪，稳压7.5V/cm电泳。
5、 电泳结束后通过紫外透视仪观察。
五、注意事项
本实验中必务必要去除RNase污染，防止RNA降解。所有试剂和器具需要用DEPC水配制和处理，并灭菌。此外可通过18s rRNA、28s rRNA、5s rRNA的三条带的亮度判定RNA的完整性。