HE染色液配制方法介绍-技术文章

HE染色液配制方法介绍

苏木精 — 伊红染色法 ( hematoxylin-eosin staining ) ,简称HE染色法 ,石蜡切片技术里常用的染色法之一 。HE染色液易于被碱性或酸性染料着色的性质称为嗜碱性( basophilia )和嗜酸性( acidophilia );而对碱性染料和酸性染料亲和力都比较弱的现象称为中性(neutrophilia)。HE染色法作为石蜡切片最常用的反色法之一,其HE染色液配制方法其实也并不难。

HE染色液配制:

1.Harris氏苏木素(1990)

苏木素 2.5g

无水酒精 25ml

硫酸铝钾(钾明矾)50g

蒸馏水 00ml

黄*色氧化汞 1.25g

冰醋酸 20ml

配制时,先将苏木素溶于酒精(平时也可将苏木素以10%的浓度溶解好,贮存备用),取一2000ml的烧杯,倾入钾明矾,加入蒸馏水,于电炉上加热,熔解钾明矾,完全熔解后,待温度至90℃左右时,加入预先溶解好的酒精苏木素,继续加热至沸腾,延续3-5min,此时溶液逐渐加深,变为紫红色,拔离电源,加入黄*色氧化汞,当充分氧化后,重新插上电源继续加热3-5min,此时溶液变深紫色,拔去电源,直接将烧杯插入预先备好的冰水里,放于暗处,第二天过滤后加入冰醋酸,即可使用三个月,但据我们的实践及多年的经验认为,只要掌握好切片的“无水化”,该染液可反复使用达一年之久(天天使用)。

注意事项:

①苏木素一定要预先溶解,否则较难彻底溶解。

②加入黄*色氧化汞后,可产生大量的气泡,因此,配制500ml的溶液,一定要选择2000ml以上的容器,否则液体便会溢出。

③当溶液变为深紫色后,应终止氧化,烧杯应直接插入冰水中,不要担心玻璃瓶会爆裂,因烧杯经特殊处理的,不会有爆裂的危险,如果有,那是属于产品质量问题。迅速冷却的主要目的是不让溶液过度氧化,以免缩短溶液的使用寿命。

④溶液过滤后方加入冰醋酸,不要颠倒过来。如果加入冰醋酸后再过滤,过滤速度将非常慢,这是因为醋酸会使滤纸中的纤维膨胀,增加了密度,使溶液不易通过,导致过滤时间延长。

⑤该苏木素在使用一段时间后,可以在表面产生金属膜。当出现这种现象时,可用粗滤纸捞去,否则贴于切片上将较难除去。

⑥苏木素加入冰醋酸后,其PH值在2-2.28之间。

2.伊红 1g

75%酒精 100ml

先将伊红用蒸馏水(少许)调成浆糊状,再加入酒精,边加边搅拌,直到彻底溶解,此时试剂有些混浊,取少许冰醋酸,加入到试剂中去,试剂逐渐转变为清亮,呈鲜红色,染出切片,效果很好。3.1%盐酸酒精:99份无水酒精加上1份浓盐酸

上海金畔生物科技有限公司是一家集产品研发、生产、销售、服务于一体的高科技生物企业。产品主要涵盖生化试剂、分子生物学试剂、细胞培养、免疫学产品及实验耗材等。HE染色试剂盒为上海金畔生物科技有限公司自产产品,其货号为G1120,在细胞HE染色的组织切片中,细胞核呈蓝色,细胞浆呈红色,二者形成鲜明的对比,易于观察分析。

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