上海金畔生物科技有限公司Hoechst33258染色液的染色原理及使用方法

Hoechst 33258也称bisBenzimide H 33258或HOE 33258，是一种可以穿透细胞膜的蓝色荧光染料，对细胞的毒性较低。常用于细胞凋亡检测，染色后用荧光显微镜观察或流式细胞仪检测。Hoechst 33258也常用于普通的细胞核染色，或常规的DNA染色。

Hoechst 33258染色原理

Hoechst?33258和Hoechst 33342均为非嵌人性荧光染料。它们在活细胞中 DNA聚AT序列富集区域的小沟处与DNA结合。活细胞或固定细胞均可从低浓度溶液中?摄取该染料。从而使细胞核着色。故又把此类染料称为DNA探针。Hoechst 33342和Hoechst 33258均可溶于水并在水溶液中保持稳定。Hoechsr-DNA的激发和发射波长分别550nm和460nm。在荧光显微镜紫外光激发时，Hoechst-DNA发出亮蓝色荧光。

Hoechst 33258的最大激发波长为346nm，最大发射波长为460nm；Hoechst 33258和双链DNA结合后，最大激发波长为352nm，最大发射波长为461nm。本Hoechst 33258染色液可直接用于固定细胞或组织的细胞核染色，也可直接用于活细胞或组织的细胞核染色。

Hoechst 33258染色方法：

1. 对于固定的细胞或组织：

a. 对于细胞或组织样品，固定后，适当洗涤去除固定剂。随后如果需要进行免疫荧光染色，则先进行免疫荧光染色，染色完毕后再按后续步骤进行Hoechst 33258染色。如果不需要进行其它染色，则直接进行后续的Hoechst 33258染色。

b. 对于贴壁细胞或组织切片，加入少量Hoechst 33258染色液，覆盖住样品即可；对于悬浮细胞，至少加入待染色样品体积3倍的染色液，混匀。室温放置3-5分钟。

c. 吸除Hoechst 33258染色液，用TBST、PBS或生理盐水洗涤2-3次，每次3-5分钟。

d. 直接在荧光显微镜下观察或封片后荧光显微镜下观察。细胞发生凋亡时，会看到凋亡细胞的细胞核呈致密浓染，或呈碎块状致密浓染。

 2. 对于活细胞或组织：

a. 加入适当量Hoechst 33258染色液，必须充分覆盖住待染色的样品，通常对于六孔板一个孔需加入1ml染色液，对于96孔板一个孔需加入100微升染色液。

b. 在适宜于细胞培养的温度下培养20-30分钟。弃染色液，用PBS或培养液洗涤2-3次即可进行荧光检测。

染色结果：该染料为DNA的特异性荧光探针，细胞核呈亮蓝色荧光.

上海金畔生物科技有限公司为生化试剂供应商，专业生产销售生化试剂、生物试剂、细胞培养、试剂盒、实验耗材等产品，Hoechst 33258染色液为上海金畔生物科技有限公司自产产品，它在嵌入双链DNA后释放强烈的蓝色荧光，对细胞的毒性较低。可用于固定细胞或组织的细胞核染色，也可用于活细胞或组织的细胞核染色。