AEC底物显色试剂盒的原理及使用方法介绍

AEC底物显色试剂是一种旨在通过过氧化物酶的催化，底物3－氨基－9－乙基咔唑氧化形成红色不溶性产物，以此鉴定过氧化物酶活性，进而确定目标分子表达的权威而经典的技术方法。其适用于辣根过氧化酶标记蛋白的免疫学检测包括蛋白质西方杂交和免疫化学，以及原位杂交染色等。

AEC底物显色试剂盒原理：

3-氨基-9-乙基咔唑 (3-amino-9-ethylcarbazole，AEC) 是过氧化物酶 (Peroxidase) 的生色底物，在过氧化物酶的催化下，过氧化氢氧化AEC形成稳定的红色沉淀产物。该红色产物不溶于水，但溶于有机溶剂。

AEC底物显色试剂盒使用方法：（仅供参考）

1．工作液配制：

取850ul无菌双蒸水，依次加入50ul溶液A、50 ul溶液B、50ul溶液C、混合均匀，即配成AEC工作液。如需要更大体积工作液，可按相应比例放大。此溶液必须现用现配，配好后避光保存，半小时内使用，过期后请将剩余的液体废弃。

2．显色：

1）蛋白质印迹膜显色：将配制好的工作液滴加在印迹膜上（或将印迹膜浸入AEC工作液中），显色时间一般为10-30min。显色完毕后，将膜浸入蒸馏水中，终止反应。

2）组织切片染色：向组织切片上加入适量AEC工作液，确保能充分覆盖样品。室温孵育10-30 min，避免光照，直至显色至预期深浅。可在显微镜下观察控制显色时间。显色后用蒸馏水洗涤即可终止显色反应。

 3）对于组织切片或细胞样品，显色反应终止后，可对其进行其他染料复染。对于膜，显色反应终止后，可以室温晾干避光保存。

AEC底物显色试剂盒注意事项：

1.由于AEC生成的颜色产物为脂溶性，因此用于IHC显色后不适合梯度酒精脱水，二甲苯透明，中性树胶封片，须用水性封片剂封片。

2.根据情况自行优化实验条件，调整显色时间，获得最佳显色效果。

3.AEC有一定毒性，操作时请采取必要的防护措施。

上海金畔生物科技有限公司为生化试剂供应商，专业生产销售生化试剂、生物试剂、细胞培养、试剂盒、仪器耗材等产品。AEC显色试剂盒为索拉报常备货产品，其货号为A2010。该AEC底物显色试剂盒加入了增强显色试剂，敏感度大大提高。产品操作便捷，显色清晰，重复性好，适用于HRP系统的 IHC 和 Western Blot实验的酶促显色。