荚膜染色试剂盒的原理及使用方法

荚膜是包围在细菌细胞外的一层粘液状或胶质状物质。某些细菌生长到一定阶段，在一定条件下会向细胞壁外分泌一层粘性的多糖类物质——荚膜。荚膜含水分多，疏松且较薄，受热易失水变形，所以不易染色，常用衬托染色法，就是将菌体着色，而将不着色的透明荚膜衬出来。

荚膜染色原理

荚膜的形成与细菌的种类及环境条件密切相关，例如鼠疫杆菌、肺炎双球菌都具有荚膜。在鉴别细菌时通过荚膜染色，有助于确定细菌种类。荚膜染色主要是对细菌进行形态结构的观察，从而能直观地了解细菌在形态结构上特性，达到区别、鉴定细菌的目的。由于荚膜与染料的亲和力弱，不容易着色；而且可溶于水，易在用水冲洗时被除去。所以通常用衬托染色法(负染色法)染色，使菌体和背景着色，而荚膜不着色，从而在菌体周围形成一透明圈。由于荚膜富含水分，制片时应自然干燥，不可以加热固定，避免加热蒸发，影响观察。

荚膜染色试剂盒使用方法

方法一：

1．在载玻片一端滴一滴无菌水，取少许培养了72小时的圆褐固氮菌在水滴中制成悬液。取一滴新配好的黑色素溶液（也可用绘图墨水）与菌悬液混合，另取一块载玻片作为推片，将推片一端平整的边缘与菌悬液以30度角接触后，顺势将菌悬液推向前方，使其成匀薄的一层，风干。

2．用纯甲醇固定1分钟。

3．加番红液数滴于涂片上，冲去残余甲醇，并染30秒钟，以细水流适当冲洗，吸干后油镜检查，背景黑色，荚膜无色，细胞红色。

方法二：

将刚果红水溶液和明胶水溶液各一滴滴于干净载片上；用接种环蘸取细菌培养液或悬浮液在载片上于上述两滴溶液混匀，自然干燥；滴加1%HCl冲洗，使涂片呈蓝色；用蒸馏水漂洗，除去HCl；，用美蓝复染1分钟，水洗，自然干燥后镜检。 镜检：有荚膜的菌，菌体蓝色，荚膜不着色，背景蓝紫色；无荚膜的菌，菌体蓝色，背景蓝紫色。由于干燥菌体收缩，菌体四周也可能有一圈狭窄的不着色环，但这不是荚膜。荚膜不着色的部分宽。 

方法三：TyLer法

 1.涂片：按常规法涂片，在空气中自然干燥。

 2.染色：用结晶紫冰醋酸染5—7分钟。

 3.用20%CuSO4水溶液洗，再用毛边纸吸干。 

4.镜检并观察结果：荚膜蓝紫色，细胞暗蓝色。

方法四： 湿墨汁法

1.制菌液：加一滴墨汁于洁净的波片上，并挑少量菌与其充分混合。 2.加盖玻片：放一清洁盖玻片于混合液上，然后在盖玻片上放一张滤纸，向下 轻压，吸收多余菌液。 3.镜检。 荚膜染色试剂盒的使用方法：1、制作一适当厚度的荚膜菌涂片，在空气中自然干燥，不需加热固定。

2、滴加适量染色液A于玻片上（以盖满菌膜为度），染色5-7分钟。

3、用染色液B冲洗涂片，切勿用流水冲洗。冲洗要适度，2-3遍即可。

4、用吸水纸吸干，并立即加1-2滴香柏油于涂片处，以防止结晶的形成。

5、油镜下观察。预期结果：背景蓝紫色，菌体紫色，荚膜无色或浅紫色。

注意事项

1.染色程度可通过改变染色时间做适当调整。

2.脱色时不可用水冲洗。

3.不能加热干燥或固定涂片，以避免水冲洗玻片，防止荚膜皱缩或脱失。

4.玻片必须洁净无油迹，以免涂片时混合液不能均匀散开。

上海金畔生物科技有限公司为生化试剂供应商，专业生产销售生化试剂、生物试剂、细胞培养、试剂盒、实验耗材等科研类产品。荚膜染色试剂盒为上海金畔生物科技有限公司自产产品，该试剂盒染色法用于有荚膜细菌如肺炎链球菌、流感嗜血杆菌、炭疽芽胞杆菌及产气荚膜梭菌的鉴定。