血清蛋白电泳操作步骤及注意事项

 血清蛋白电泳即用电泳方法测定血清中各类蛋白占总蛋白的百分比。下面详细介绍血清蛋白电泳操作步骤及注意事项。

血清蛋白电泳操作步骤

1、 开机，启动电泳仪。

2、 将1个(用于7 PROTEIN或用于15 RPOTEIN)或2个(用于30 PROTEIN)加样梳置于平板上，有数字的一端向上，在2分钟内完成每块加样梳的加样，每孔加10ul样品，然后齿梳向上把加样梳放于湿盒内5分钟。

3、选择相应的电泳程序，使用HYDRAGEL 7 PROTEIN(E)时选择仪器的“PROTEIN 7”电泳程序，使用HYDRAGEL 15/30 PROTEIN(E)时选择仪器的“PROTEIN 15/30”程序。 

4、从包装袋内取出缓冲条，将其固定在电极支架背侧的钉上，再取出凝胶，用薄滤纸快速轻轻地吸去凝胶表面多余的液体，在温控板表面下1/3处加120 ?l[HYDRAGEL 7 PROTEIN(E)]或200ul[HYDRAGEL 15 PROTEIN(E)]蒸馏水或去离子水，将凝胶片底边紧靠框架底边，边缘对齐边线，略弯曲凝胶片慢慢放平，注意凝胶片下面勿出现气泡。

5、自然放下支架，从湿盒中取出加样梳并去除齿梳下的保护支架，7和15个样品分析的加样梳置于支架6号位，30个样品分析的加样梳则分别置于3号和9号位，注意点样梳上的数字必须面对操作者，关上电泳舱盖，按下键盘左侧的绿色箭头“START”键，电泳开始，确保仪器右侧的空气通道不被堵塞。

6、电泳仪自动发出蜂鸣声,提示电泳结束，打开电泳盖，将加样梳和缓冲条丢弃，取出已烘干的胶片，用湿纸巾擦拭电极和温控板，将胶片固定于凝胶支架上放入染色空间中，在检查染色液瓶内是否有300ml染色液，脱色液瓶内是否有1000ml脱色液以及是否排空了废液瓶后，选择“PROT./B1-B2/Hb”染色程序并按“start”键开始染色。

7、在染色、脱色以及干燥步骤完成后，电泳仪自动发出蜂鸣声，取出凝胶支架，将烘干的胶片用光密度仪进行扫描，若希望胶片背景更加清晰，在进行扫描前可以额外增加一个冲洗步骤，程序为“WASH ISOENZ/GEL”。 ㈧ 关机，在电脑系统上对扫描结果进行分析。

血清蛋白电泳操作注意事项

1、为达到最佳检测效果，同一试剂盒内的所有组分必须一并使用。

2、氨基黑染液的配制必须按照试剂盒内使用说明配置，否则会降低蛋白片段的检测效果。

3、用薄滤纸吸去凝胶表面多余液体时，接触时间不能太长，应快速移去，以免凝胶脱水。

4、注意先挂缓冲条再放凝胶片，缓冲条取出时应均匀挤捏使缓冲液能分布均匀。

血清蛋白电泳原理

在碱性环境里，血清蛋白皆带阴电荷，在电场中向阳极泳动，因各蛋白质等电点和分子量有差异，分子量小、阴电荷多泳动最快;分子量大、阴电荷较少者泳动较慢。电泳后，从阳极开始，依次为白蛋白、a1球蛋白、a2球蛋白、β球蛋白和γ球蛋白五个区带。