花粉TTC染色试验方法

 花粉TTC染色试验方法 通过花粉活力的测定，可以了解花粉的可育性，并掌握不育花粉的形态和生理特征。在作物杂交育种、作物结实机理和花粉生理的研究中，常涉及花粉活力鉴定。掌握花粉活力的快速测定方法，是进行雄性不育株的选育、杂交技术的改良以及揭示内外因素对花粉育性和结实率影响的基础。

Ⅰ、碘-碘化钾染色法

多数植物正常花粉呈规则形状，如圆球形或椭球形、多面体等，并积累淀粉较多，通常I2-KI可将其染成蓝色。发育不良的花粉常呈畸形，往往不含淀粉或积累淀粉较少，用I2-KI染色，往往呈现黄褐色。因此，可用I2-KI溶液染色法测定花粉活力。

一、仪器、药品与材料

（一）实验材料

各种着生花芽的植物枝条，花芽要充分发育并已含苞待放。

（二）仪器与用品

显微镜，恒温箱，镊子，载玻片，盖玻片。

（三）试剂

I2-KI溶液：取 2 g KI 溶于5~10 mL蒸馏水中，然后加入1 g I2，待全部溶解后，再加蒸馏水定容至300 mL。贮于棕色瓶中备用。

二、实验步骤

1．花粉采集：取充分成熟将要开花的花蕾，剥除花被片等，取出花药。

2．镜检：取一花药置于载玻片上，加 1 滴蒸馏水，用镊子将花药充分捣碎，使花粉粒释放，再加 1~2 滴I2- KI溶液，盖上盖玻片，于低倍显微镜下观察。凡被染成蓝色的为含有淀粉的活力较强的花粉粒，呈黄褐色的为发育不良的花粉粒。观察 2~3 张装片，每片取5个视野，统计花粉的染色率，以染色率表示花粉的育性。

注：此法不能准确表示花粉的活力，也不适用于研究某一处理对花粉活力的影响。因为核期退化的花粉已有淀粉积累，遇 I2-KI呈蓝色反应。另外，含有淀粉而被杀死的花粒遇I2-KI 也呈蓝色。

Ⅱ、氯化三苯基四氮唑法（TTC法）

TTC（2，3，5－三苯基氯化四氮唑）的氧化态是无色的，可被氢还原成不溶性的红色三苯甲潛（TTF）。用TTC的水溶液浸泡花粉，使之渗入花粉内，如果花粉具有生命力，其中的脱氢酶就可以将TTC作为受氢体使之还原成为红色的TTF；如果花粉死亡便不能染色；花粉生命力衰退或部分丧失生活力则染色较浅或局部被染色。因此，可以根据花粉染色的深浅程度可鉴定种子的生命力。

一、仪器、药品与材料

（一）实验材料

各种植物的含苞待放的花蕾。

（二）仪器与用品

显微镜，恒温箱，镊子，载玻片，盖玻片。

（三）试剂

0.5 % TTC 溶液：准确称取 0.5 g TTC，溶于少量水中，并定容至100 mL。TTC水溶液呈中性，pH 7±0.5，不宜久藏，应随用随配。

二、实验步骤

1．同方法Ⅰ-1步骤，取少数花粉于载玻片上，加1~2 滴TTC溶液，盖上盖玻片。

2．将制片于 35 ℃恒温箱中放置15 min，然后置于低倍显微镜下观察。凡被染为红色的活力强，淡红的次之，无色者为没有活力的花粉或不育花粉。