PAGE凝胶银染试剂盒使用步骤及注意事项

PAGE凝胶银染试剂盒主要用于聚丙烯酰胺凝胶电泳染色。其灵敏度比EB高200倍，该产品整个过程只需要20分钟，操作简单，灵敏度高，能检测到10ng以下的DNA 条带。下面就以上海金畔生物科技有限公司产PAGE凝胶银染试剂盒介绍使用PAGE凝胶银染试剂盒染色操作步骤，以及操作过程中需要的注意的问题。

操作步骤:

一、染色液配制

需要配制的染色液体积根据PAGE 胶的大小而定，一般的mini-PAGE 胶需要20-30mL。配制用的器皿清洗干净后用去离子水涮洗，染色液须用去离子水配制，现用现配。如果配制的溶液体积不是100mL，可以按比例改变各成分用量。

1，硝酸银染液：称取0.2g 硝酸银，加入到90ml 去离子水中彻底溶解，加入10ml 溶液A 混匀，现用现配。

2，显色液：分别取溶液B 和溶液C 各10ml 加入80ml 去离子水中混匀，现用现配。

3，终止液：取终止液D 10ml 加去离子水稀释至100ml，现用现配。

二、染色：

1，PAGE 电泳结束后，将PAGE 蛋白胶转移至玻璃平皿或搪瓷盘中，用去离子水漂洗两遍，每次2min。

2，将PAGE 胶转移至硝酸银染液中，使染液没过PAGE 胶，室温染色10min。可置于摇床上缓慢摇晃，使其染色均匀。

3，弃去染色液，用去离子水快速漂洗三次，每次半分钟。

4，将PAGE 胶转移至显色液中，使显色液没过PAGE 胶，室温摇晃显色至条带清晰可见。

5，可选，将PAGE 胶转移至终止液中，终止显色1min。

6，银染后PAGE 胶可拍照保存或用于后续试验。

注意事项：

1. 银染主要出现在PAGE 胶的表面，使用薄胶（0.5-0.75mm）可以提高灵敏度。

2. 对于考马斯亮蓝染色的SDS-PAGE 胶，可用甲醇将胶漂洗后，继续进行银染。考染过程中的乙酸会干扰银染，因此要确保将PAGE 凝胶中残留的乙酸彻底洗净。

3. 不同蛋白质对银染的反应是不一样的，尤其是碱性蛋白染色效果差。因此，不宜用银染测定不同蛋白的比例。

4. 染色过程中，缓慢的振荡是必要的，一般选择40-60 rpm.

5. 凝胶表面的裂纹多是由于压力、手印及表面干燥所致，所以全程中都应带手套操作。

6. PAGE 凝胶背景呈均一的黑色多是水中的杂质引起的，所以溶液的配制应使用电导率小于1 μS 的去离子水。

7. 如果染色后有呈灰尘或烟雾状灰色或棕色的沉淀出现在凝胶表面，可能是在几步漂洗过程中洗得不够彻底，或是染色过程时温度太低。

8. 较深的银染背景多是丙烯酰胺中的杂质所致。

9. PAGE 胶中的甘油、尿素、甘氨酸、Triton X-100 和两性电解质这些物质会干扰银染。

10. 室温操作时，温度的波动往往会干扰银染的效果，恒温水浴可以解决这个问题。

11. 凭借戊二醛预处理可以使各种蛋白质的染色提高40 倍。

12. 染色使用的玻璃器皿必须非常干净，用酸浸泡可以满足要求。

13. 银染应尽快照相，随着时间延长，蛋白条带会变浅，而背景会加深。

14. 银染容器最理想的是玻璃平皿，其次是搪瓷盘和密胺塑料盘等。

上海金畔生物科技有限公司是专业生化试剂供应商。为您提供PAGE凝胶银染试剂盒现货发售。此外上海金畔生物科技有限公司还提供完善的售后技术支持，如果您在使用过程终于到问题可以拨打4009686088寻求技术支持。