LB培养基的配制及应用

 LB一般被解释为Luria-Bertani，然而根据其发明人贝尔塔尼(Giuseppe Bertani)的说法，这个名字来源于英语lysogeny broth，即溶菌肉汤。LB培养基是近年来用于培养基因工程受体菌(大肠杆菌)的常用培养基之一。

酵母提取物：酵母经破壁后将其中蛋白质、核酸、维生素等抽提，再经生物酶解的富含小分子的氨基酸、肽、核苷酸、维生素等天然活性成分的淡黄色粉末，其中氨基酸含量30%以上，总蛋白50%以上，核苷酸10%以上，广泛用作生物培养基和食品调味品制造原料。

胰化蛋白胨：一种优质蛋白胨，是以新鲜牛肉和牛骨经胰酶消化，浓缩干燥而成的白色粉末，含有丰富的氮源、氨基酸等。

酵母提取物为微生物提供碳源、能源、磷酸盐、生长因子、维生素等;蛋白胨主要提供氮源;NaCl主要提供微生物生长环境(如渗透压)，其次是提供无机盐。

在配制固体培养基时还要加入一定量琼脂作凝固剂。琼脂在常用浓度下96℃时溶化，一般实际应用时在沸水浴中或垫以石棉网直接煮沸溶化。琼脂在40℃时凝固，通常不被微生物分解利用。固体培养基中琼脂的含量根据琼脂的质量和气温的不同而有所不同。

由于这种培养基多用于培养细菌，因此，要用稀酸或稀碱将其pH调至中性或微碱性，以利于细菌的生长繁殖。

LB培养基配方(每升)

　　酵母提取物 5g

　　胰化蛋白胨 10g

　　氯化钠 10g

　　NaOH调pH至7.0，121℃、20min高压灭菌。

LB固体培养基

　　LB培养基 1L

　　琼脂粉 15g

　　NaOH调pH至7.0，121℃、20min高压灭菌。

　　有时需在培养基中添加抗生素，琼脂凝固点为40℃，所以添加抗生素最好在50～55℃。

LB培养基用途

　　用于一般细菌培养，特别用于分子生物学试验中大肠杆菌的保存和培养。

　　LB培养基使用原理：

　　蛋白胨、酵母膏粉提供氮源、维生素和生长因子;氯化钠维持均衡的渗透压;葡萄糖提供碳源;琼脂是培养基的凝固剂。

LB培养基配制方法

　　配制每升培养基，应该在950 ml去液态lb培养基离子水中加入：胰化蛋白胨10g 酵母提取物5g NaCl 10g 摇动容器直至溶质溶解。用5mol/LNaOH调pH至7.0。用去离子水定容至1L。在15psi高压下蒸汽灭菌20min。

　　LB固体培养基1L和液体一样，加15g琼脂粉，一定要在温度降下之前加好抗固态LB培养基生素，并且倒好板。

LB固体培养基倒板

　　1.配制：100ml LB培养基加入1.5g琼脂粉。

　　2.抗生素的加入：高压灭菌后，将融化的LB固体培养基置与55℃的水浴中，待培养基温度降到55℃时(手可触摸)加入抗生素，以免温度过高导致抗生素失效，并充分摇匀。

　　3.倒板：一般10ml倒1个板子。培养基倒入培养皿后，打开盖子，在紫外下照10-15分钟。

　　4.保存：用封口胶封边，并倒置放于4℃保存，一个月内使用。 配400ml的话成分按比例减少就行了，pH还是要按规定的。

LB培养基设计不同的离子对大肠杆菌生长状况的影响

　　以下方法仅供参考：

　　1.首先养几个平板固体培养基培养的大肠杆菌，保证这些细菌来自于同一个克隆;

　　2.采用液体培养并用分光光度计测定浊度来评价大肠杆菌生长。

　　3.盐可选择氯化钠、氯化钾、氯化镁、氯化锌、铵盐、磷酸盐等;

　　4.浓度差别可做，可不做;

　　5.因为分光光度计的准确性有一定要求，培养时间就不能太长，最多8小时;

　　根据这些条件设计实验就容易了。大体上是，先配制好各种液体培养基;然后从1中挑一个菌落放到一个起始的基本LB液体培养基，培养到稍微有点浑时，就可以向各种培养基中加同样体积的细菌;最后就是测定OD值了。记得每个培养基做3个重复管。