PDA培养基配方及配制方法-技术文章

PDA培养基配方及配制方法

PDA培养基是人们对马铃薯葡萄糖琼脂培养基的简称。宜培养酵母菌、霉菌、蘑菇等真菌。下面就详细介绍了pda培养基的配方及配制方法及步骤。

 1.PDA培养基的配方:

马铃薯200克  葡萄糖20克  琼脂20克  蛋白胨5克  磷酸二氢钾 3克  硫酸镁 1.5克  水1000ml   PH自然。

2.PDA培养基的制作工艺流程:

设计培养基配方→材料煮汁→补水→琼脂溶解→再次补水→药品溶解→调PH值→分装→灭菌→摆斜面

3.PDA培养基的制作步骤

a 材料煮汁:

1000ml水置于锅中,待烧开后加入200克去皮、切片的马铃薯煮20到30分钟,至薯片软而不烂,用八层纱布过滤,取滤液。

b 琼脂溶解和补水:

将马铃薯滤液重新加入到锅中,补水至1000ml,继续加热沸腾而后加入琼脂,继续文火煮沸至琼脂完全溶解,再次补水至1000ml。

c 药品溶解:

在琼脂溶解后加入葡萄糖20克,磷酸二氢钾3克,硫酸镁1.5克,蛋白胨5克。

4 分装:

a.试管培养基的分装

分装所用的容器事先一定要清洗干燥,新购的试管内一般都残留烧碱,应先用稀硫酸在烧杯中煮沸,然后用清水洗干净,口朝下晾干后备用。不能现洗现用,以免因管壁附有水膜导致培养基在试管口滑动。

分装试管时尽量避免培养液黏附试管口,以免培养基粘附棉塞,增加污染几率。

试管装量:制斜面培养基一般为试管高度的1/4—1/3。

b.平板培养基的分装

将配制好的培养基倒入三角瓶,(三角瓶也一定要清洗干净),体积不要超过三角瓶的1/3(否则加热时液体沸腾易把棉塞冲开)

5 加棉塞:

棉塞要用普通棉花制作,不能用脱脂棉。

棉塞的大小,松紧要适度,过松达不到滤菌的目的,过紧妨碍空气流通,松紧度以于抓棉塞整个试管提起为宜。标准的棉塞应是塞头略大,不易变形,一般塞入试管口2—3厘米。占塞总长的2/3—1/3裸露在试管口外,比管口略大。

三角瓶棉塞同样松紧适中,一般塞入三角瓶3~4cm.

6 装锅灭菌:

将塞好棉塞的试管或三角瓶装进置物桶内,桶未装满用空试管填满以免试管倾倒,即可放入手提式高压灭菌锅中,盖好报纸,防止灭菌时棉塞被冷凝水淋湿,扭紧锅盖,排净锅内冷空气,待温度升至122—124℃之间开始计时30min,灭菌结束。

7 烘棉塞:

当压力降到0.05 Mp时,带压进入无菌室,压力快降至零时,开始放气。压力表指针归零后,打开锅盖,拿出报纸,将盖在锅上嵌一小缝,用锅内余热烘干棉塞,维持30min。

8 摆斜面,倒平板,冷却:

30min后棉塞烘干后一定要趁热摆斜面或倒平板。

a.斜面做法

在桌面平放2厘米厚木条,两边用重物压住,防止试管滑落,将试管放在木条上,培养基冷却后即凝固成斜面。培养基在试管里的斜面一般为试管长度的3/4,用于保藏菌种的试管应短些,以减少蒸发面积,摆放好的斜面在培养基未凝固前不能移动,以免培养基断裂或表面不平。培养基凝固后方可收藏备用。

b.平板做法

等三角瓶培养基降到50℃左右时,倒平板(温度太高易产生冷凝水,导致细菌污染,温度太低,培养基凝固)。

注 :平板培养皿事先在传递窗中进行紫外线灭菌30min,然后放入无菌室超净工作台上,备用。

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