论细胞培养中胰蛋白酶的作用

胰蛋白酶为蛋白酶的一种，是从牛、羊、猪的胰脏中所提取的一种丝氨酸达标水解酶。它不仅起到消化酶的作用，还能限制分解糜蛋白酶原、磷脂酶等其它酶的前体，起活化作用。在细胞培养中，胰蛋白酶的作用是使细胞间的蛋白质水解从而使细胞离散。不同的组织或者细胞对胰酶的反应是不一样的，分散细胞的活性还要与其的浓度、温度和时间有关。在pH值8.0、温度为37℃的条件下是胰酶分散细胞的作用能力最强。

胰蛋白酶的使用方法：

1.吸去培养液，用无菌的PBS、Hanks液或无血清培养液洗涤细胞一次，以去除残余的血清。

2.加入少量胰蛋白酶消化液，盖过细胞即可，室温放置1-2分钟。不同的细胞消化时间有所不同，对于贴壁牢固的细胞可适当延长消化时间。

3.显微镜下观察，细胞明显收缩，并且肉眼观察培养器皿底部发现细胞的形态发生明显的变化；或者用枪吹打细胞发现细胞刚好可以被吹打下来。此时吸除消化液。加入含血清的细胞培养液，吹打下细胞，即可直接用于后续实验。

4.如果发现消化不足，可加入胰蛋白酶消化液重新消化。

5.如果发现细胞消化时间过长，未及吹打细胞，细胞已经有部分直接从培养器皿底部脱落，直接用胰酶细胞培养液把细胞全部吹打下来。1000-2000g离心1分钟，沉淀细胞，尽量去除胰酶细胞消化液后，加入含血清的完全培养液重新悬浮细胞，即可用于后续实验。

使用胰蛋白的注意事项：

1.使用胰蛋白酶时应把握好浓度、温度和时间，以免因消化过度对细胞造成损伤。

2.配置胰蛋白酶溶液时选用不含Ca2+ 、 Mg2+ 的 BSS ，以免降低胰酶的活性。

3.之中消化时可选用含有血清培养液或以酶抑制剂来终止胰酶对细胞的最用。

4. 不宜4℃长期保存，切忌反复冻融，小量使用时建议分装冻存。

上海金畔生物科技有限公司生产的胰蛋白酶消化液(Trypsin Solution)含0.25%胰酶和含0.1%的胰酶，不含EDTA和酚红，溶于无钙镁平衡盐溶液中，经过滤除菌，可以直接用于培养细胞和组织的消化。本产品具有方便快速、稳定安全、细胞状态好等特点。通常室温消化2分钟左右就可以消化下大多数贴壁细胞， 在细胞培养中充分发挥胰蛋白酶的作用。