上海金畔生物科技有限公司新型植物基因组试剂盒操作步骤

上海金畔生物科技有限公司植物基因组试剂盒采用可以特异性结合DNA的离心吸附柱和独特的缓冲液系统提取植物的基因组DNA。离心吸附柱中采用的硅基质材料为本公司特有新型材料，能够高效、专一吸附 DNA，可最大限度去除杂质蛋白及细胞中其他有机化合物。下面介绍植物基因组试剂盒操作步骤。

操作步骤：

使用前先在漂洗液中加入无水乙醇，加入体积请参照瓶体上的标签。所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心。

1、植物组织预处理：取新鲜植物组织（不超过 100mg）或干重组织（不超过 20mg），于液氮中充分研磨至细粉状，让液氮自然挥发。

2、将研磨好的植物组织粉末迅速转移到预先装有 400ul 溶液 A、20ul RNase A（10mg/ml）和 5ul β-巯基乙醇的离心管中，充分颠倒混匀，室温放置 10min。

3、加入 140ul 溶液 B，充分颠倒混匀，12000rpm 离心 10min，将上清转移至新离心管(约 400-500ul)，注意不要吸入沉淀。

4、加入和上清相同体积的溶液 C，充分颠倒混匀，再加入和溶液 C 相同体积的无水乙醇，此时若出现絮状物，将絮状物吹散后一起加入吸附柱中，12000rpm 离心 5min，弃废液，一次加不完可分两次加入。

注意：如果吸附柱膜呈绿色或离心时有堵塞现象，可向吸附柱中加入 600ul 无水乙醇，并适当延长离心时间。

5、 向吸附柱中加入 600ul 漂洗液(请先检查是否已加入无水乙醇)，12000rpm 离心 1min，弃废液，将吸附柱放回收集管。

6、向吸附柱中加入 600ul 漂洗液，12000rpm 离心 1min，弃废液，将吸附柱放回收集管中， 12000rpm 离心 2min。

7、将吸附柱置于室温或 50℃温箱放置数分钟，否则残余的乙醇可能会影响后续的实验如酶切、PCR 等。

8、将吸附柱放入一个干净的离心管中，向吸附膜中央悬空滴加 50-200ul 经 65℃水浴预热的洗脱液，室温放置1-5min，12000rpm 离心 2min，即可得到高质量的植物基因组 DNA。

9、(可选)离心所得洗脱液再加入吸附柱中，室温放置 2min，12000rpm 离心 2min。