dapi染色剂操作注意事项与使用方法

DAPI染色剂(DAPI Staining Solution)是经过精心优化几乎适用于所有常见细胞和组织细胞核染色的染色液。DAPI染色剂对人体有一定刺激性，所以再细胞染色试验中要特别注意。下面分别介绍DAPI染色剂操作注意事项与使用方法步骤。

DAPI，即2-(4-Amidinophenyl)-6-indolecarbamidine dihydrochloride，也称DAPI dihydrochloride，分子式为C16H15N5·2HCl，分子量为350.25，CAS Number 28718-90-3。DAPI是一种可以穿透细胞膜的蓝色荧光染料。和双链DNA结合后可以产生比DAPI自身强20多倍的荧光。和EB(ethidium bromide)相比，对双链DNA的染色灵敏度要高很多倍。DAPI染色常用于细胞凋亡检测，染色后用荧光显微镜观察或流式细胞仪检测。DAPI也常用于普通的细胞核染色以及某些特定情况下的双链DNA染色。DAPI的最大激发波长为340nm，最大发射波长为488nm；DAPI和双链DNA结合后最大激发波长为364nm，最大发射波长为454nm。 DAPI染色液用于固定细胞或组织的细胞核染色。

DAPI染色剂注意事项：

1、DAPI对人体有一定刺激性，请注意适当防护。

2、荧光染料都存在淬灭的问题，建议染色后尽量当天完成检测。

3、为减缓荧光淬灭可以使用抗荧光淬灭封片液。

4、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明：

1、对于细胞或组织样品，固定后，适当洗涤去除固定剂。随后如果需要进行免疫荧光染色，则先进行免疫荧光染色，染色完毕后再按后续步骤进行DAPI染色。如果不需要进行其它染色，则直接进行后续的DAPI染色。

2、对于贴壁细胞或组织切片，加入少量DAPI染色液，覆盖住样品即可。对于悬浮细胞，至少加入待染色样品体积3倍的染色液，混匀。

3、室温放置3-5分钟。

4、吸除DAPI染色液，用TBST、PBS或生理盐水洗涤2-3次，每次3-5分钟。

5、直接在荧光显微镜下观察或封片后荧光显微镜下观察。细胞发生凋亡时，会看到凋亡细胞的细胞核呈致密浓染，或呈碎块状致密浓染。

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