SDS-PAGE的浓缩胶配方-技术文章

SDS-PAGE的浓缩胶配方

浓缩胶的作用是有堆积作用,凝胶浓度较小,孔径较大,把较稀的样品加在浓缩胶上,经过大孔径凝胶的迁移作用而被浓缩至一个狭窄的区带。当样品液和浓缩胶选pH6.8的TRIS/HCL缓冲液,电极液选TRIS/甘氨酸。电泳开始后,HCL解离成氯离子,甘氨酸解离出少量的甘氨酸根离子。蛋白质带负电荷,因此一起向正极移动,其中氯离子最快,甘氨酸根离子最慢,蛋白居中。电泳开始时氯离子泳动率最大,超过蛋白,因此在后面形成低电导区,而电场强度与低电导区成反比,因而产生较高的电场强度,使蛋白和甘氨酸根离子迅速移动,形成以稳定的界面,使蛋白聚集在移动界面附近,浓缩成一中间层。大大提高了电泳的灵敏度。

SDS-PAGE的浓缩胶(也称堆积胶、积层胶或上层胶),具体配方如下:

成分 配制不同体积SDS-PAGE浓缩胶所需各成分的体积(毫升)
5%胶 2 3 4 6 8 10
蒸馏水 1.4 2.1 2.7 4.1 5.5 6.8
30%Acr-Bis(29:1) 0.33 0.5 0.67 1.0 1.3 1.7
1MTris,pH8.8 0.25 0.38 0.5 0.75 1.0 1.25
10%SDS 0.02 0.03 0.04 0.06 0.08 0.1
10%过硫酸铵 0.02 0.03 0.04 0.06 0.08 0.1
TEMED 0.002 0.003 0.004 0.006 0.008 0.01
 

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