bca法测蛋白浓度步骤

 bca法是常用蛋白浓度测定方法之一。其他蛋白浓度测定方法还有考马斯亮蓝法、bradford法测蛋白浓度等。本文是用bca法测定蛋白浓度。是使用上海金畔生物科技有限公司BCA蛋白浓度测定试剂盒完成本实验。

下面是bca法测蛋白浓度步骤：

1. 标准曲线的绘制：取一块酶标板，按照下表加入试剂 ；

2. 根据样品数量，按50体积BCA试剂A加1体积BCA试剂B（50:1）配制适量BCA工作液，充分混匀；    

3. 各孔加入200μL BCA工作液；    

4. 把酶标板放在振荡器上振荡30sec，37℃放置30分钟，然后在562nm下比色测定。以蛋白含量（μg）为横坐标，吸光值为纵坐标，绘出标准曲线；   

5. 稀释待测样品至合适浓度，使样品稀释液总体积为20μL，加入BCA工作液200μL，充分混匀，37℃放置30分钟后，以标准曲线0号管做参比，在 562nm波长下比色，记录吸光值；     

6. 根据所测样品的吸光值，在标准曲线上即可查得相应的蛋白含量（μg），除以样品稀释液总体积（20μL），乘以样品稀释倍数即为样品实际浓度（单 位：μg/μL）。

【bca法优缺点】 

(一) 操作简单，快速，45分钟内完成测定，比经典的Lowary法快4倍且更加方便； 

(二) 准确灵敏，试剂稳定性好，BCA试剂的蛋白质测定范围是20-200μg/ml，微量BCA测定范围在0.5-10μg/ml。 

(三) 经济实用，除 试管 外，测定可在微板孔中就进行，大大节约样品和试剂用量； 

(四) 抗试剂干扰能力比较强，如去垢剂，尿素等均无影响