Tris饱和酚配制及作用-分子生物实验

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Tris饱和酚配制及作用

   Tris 饱和酚是用 Tris-HCl（pH8.0）饱和过的重蒸酚，为浅黄色透明液体，有刺激性气味，上层为 Tris 盐酸缓冲液，pH>7.8，下层为酚相，内加有抗氧化的 8-羟基喹啉。Tris 饱和酚用于分离 DNA。

   Tris 饱和酚的配置：冰箱取出重蒸酚,室温放置，之后 68 度水浴溶化,切勿立即放入 68度的水浴中，以防玻璃炸裂，加 8－羟基喹啉至 0.1％和β－巯基乙醇至 0.2％,（原液14.4MOL/ML），混匀，溶液呈现黄色，倒入分液漏斗中（也可在烧杯中进行）加入等溶剂的 1MOL/ML 的 Tris(PH8.0),反复混匀后，静至分层；放出下层黄色酚液，弃上层、加固体Tris 约 1g/100ml,摇匀，去水相、加 0.1MOL/ML Tris(PH8.0)平衡数次，至 PH 为 8.0、0.1MOL/ML Tris(PH8.0)于棕色瓶中 4 度保存。

  组织裂解液，确保 pH 为 8.0 左右(可加入 0.1 体积的 1M Tris-HCl，pH8.0，将其调为 8.0 左右)，再加入 0.5 体积的 Tris 饱和酚（使用时静置，取下层酚相使用。上层为Tris-HCl 溶液，是为阻止酚与空气接触，以减缓酚的氧化），0.5 体积氯仿：异戊醇(24：1) ，振荡 10 秒钟后冰浴 15 分钟。离心后取水相（上层）加等体积异丙醇沉淀 DNA，75%乙醇漂洗 1 次，微干燥后溶于适量 TE 中备用。
  Tris 饱和酚一般 PH 大于 7.8，用于 DNA 的提取。其中，酚是强的蛋白变性剂，可以使细胞或组织中的蛋白质变性析出，而 Tris 的主要作用是防治止酚类氧化，若酚类氧化，则会形成醌（两个苯环），醌含有强自由基，会破坏核酸结构。同时，由于 PH 值大于 7，在碱性环境中 DNA 处于水相，RNA 处于有机相，从而分离上清，即可得到 DNA。
  Tris 平衡酚有较强的腐蚀性，应尽量避免皮肤接触或吸入体内。如发现变为红色或棕色，表明已发生氧化，不能继续使用。
  北京上海金畔生物科技有限公司科技有限公司自产产品 Tris 饱和酚又名 Tris 平衡酚，在碱性条件下（pH>7.8）用于 DNA 的提取，更有其他

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