4%多聚甲醛怎么配-分子生物实验

4%多聚甲醛怎么配

多聚甲醛(Paraformalclehyde)又称固体甲醛,是一类线型短链的聚氧甲撑二醇HO(CH2O)nH(式中的n=8–100)混合物,其中还含有少量水份和甲醇。多聚甲醛性状为甲醛的固体聚合物。白色无定型粉末,有辛辣气味。 其配制方法如下:
(1)4%多聚甲醛-0.1mol/L磷酸缓冲液(pH7.3)
试剂:多聚甲醛          40g
0.1mol/L磷酸缓冲液        至1000ml
配制方法:称取40g多聚甲醛,置于三角烧瓶中,加入500~800ml 0.1mol/L磷酸缓冲液(Phosphate Buffer以下简称PB),加热至60℃左右,持续搅拌(或磁力搅拌)使粉末完全溶解,通常需滴加少许1n NaOH才能使溶液清亮,最后补足0.1mol/L的PB于1000ml,充分混匀。
该固定剂较适于光镜免疫细胞化学研究,最好是动物经灌注固定取材后,继续浸泡固定2~24h。另外,该固定剂较为温和,适于组织标本的较长期保存。
(2)4%多聚甲醛-磷酸二氢钠/氢氧化钠
试剂:A液:多聚甲醛    40g
蒸馏水          400ml
B液:Na2HPO4·2H2O    16.88g
蒸馏水          300ml
C液:NaOH         3.86g
蒸馏水          200m
配制方法:A液最好在500ml的三角烧瓶中配制(方法同前),至多聚甲醛完全溶解后冷却待用。注意,在溶解多聚甲醛时,要尽量避免吸入气体或溅入眼内。B液和C液配制好后,将B液倒入C液中,混合后再加入A液,以1n NaOH或1N HCl 将pH调至7.2~7.4,最后,补充蒸馏水至1000ml充分混合,4℃冰箱保存备用。
该固定剂适于光镜和电镜免疫细胞化学研究,用于免疫电镜时,最好加入少量新鲜配制的戊二醛,使其终浓度为0.5%~1%。该固定剂较温和,适于组织的长期保存。组织标本于该固定液中,4℃冰箱保存数月仍可获得满意的染色效果。

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