简述溶菌酶的制备及应用领域

溶菌酶多以蛋清为原料，用于生化研究，临床上用于急慢性咽喉炎、扁平苔癣、扁平疣等疾病的治疗。通常为白色粉末，溶于水，不溶于乙醚和丙酮，最适pH值为6.5。酸性介质中可稳定存在，碱性介质中易失活。

溶解酶的制备：

1. 原料处理：新鲜或冰冻蛋清（或蛋壳水）70kg，用试纸测其pH值，应在8.0左右，经解冻后通过铅筛，除去蛋清中的脐带、蛋壳碎片及其他杂质。

2. 吸附：用冰水冷却并搅拌蛋清，使温度降到5℃，缓缓加入724树脂10kg，搅拌，使树脂完全悬浮在蛋清中。保持温度0-10℃，再继续搅拌5h。将蛋清移入冷库，在0-10℃静置过液。

3. 洗涤、洗脱 隔天把上层蛋清清液倾出，下层用清水洗去附着的蛋白质，先后共洗四次。最后将树脂抽滤去水分，用24kg0.15M磷酸缓冲液（pH6.5）分三次加入树脂搅拌，每次搅拌15min后抽滤去水分。然后用10%硫酸铵18kg，分4次洗脱溶菌酶。合并洗脱液，加入32%（重量/体积）固体硫酸铵使含量达40%，析出白色沉淀。在冷处放置过夜，过滤出沉淀。

4.透析：将沉淀溶解于1.5L蒸馏水中，在冷库内透析24-36h，除去大部分硫酸铵。

5.盐析：透析完毕，将溶液用滤纸过滤，得澄清透析液。用滴管慢慢加入氢氧化钠溶液，使pH上升到8.5-9.0，如有白色沉淀，应即离心除去。然后在搅拌下加入3N盐酸，使溶液pH为3.5。按体积缓缓加入5%固体氯化钠，生成白色沉淀。在0-10℃冷库放置48h，抽滤得到溶菌酶沉淀。

6.干燥沉淀内加入10倍量0℃无水丙酮，搅拌使颗粒松细，在冷处静置数小时，滤去丙酮。沉淀用五氧化二磷真空干燥，即得口服或外用溶菌酶粉剂原料。如不用丙酮脱水，可将溶菌酶透析液冷冻干燥可得不含氯化钠的溶菌酶成品。按蛋清重量计，收率0.1%。

溶解酶的应用领域：

1．溶菌酶是一种无毒、无副作用的蛋白质，又具有一定的溶菌作用，因此可用作天然的食品防腐剂。现已广泛应用于水产品、肉食品、蛋糕、清酒、料酒及饮料中的防腐；还可以添入乳粉中，使牛乳人乳化，以抑制肠道中腐败微生物的生存，同时直接或间接地促进肠道中双歧杆菌的增殖。

2．溶菌酶作为一种存在于人体正常体液及组织中的非特异性免疫因素，具有多种药理作用，它具有抗菌、抗病毒、抗肿瘤的功效，医用溶菌酶其适应症为出血、血尿、血痰和鼻炎等。

3．溶菌酶具有破坏细菌细胞壁结构的功能，以此酶处理G+细菌得到原生质体，因此，溶菌酶是基因工程、细胞工程中细胞融合操作必不可少的工具酶。