Calcein, AM 钙黄绿素乙酰甲酯-荧光染料-染料/染色剂

Calcein, AM 钙黄绿素乙酰甲酯

别名 钙黄绿素乙酰甲酯
英文名称 Calcein, AM
CAS 148504-34-1
分子式 C46H46N2O23
分子量 994.86
储存条件 -20°C干燥避光保存,保质期12个月
纯度 ≥90%(HPLC)
外观(性状) 白色或浅黄色晶体
单位

      Calcein, AM是一种可对活细胞进行荧光标记的细胞染色试剂,它穿透细胞膜进入细胞后被细胞内的酯酶剪切形成Calcein,从而被滞留在细胞内,发出强绿色荧光。与其它同类试剂(如 BCECF, AM和CFDA)相比,Calcein, AM的细胞毒性很低。Calcein的激发和发射波长分别为 490 nm和515 nm。
      Calcein, AM仅对活细胞染色。作为核染色染料的PI 不能穿过活细胞的细胞膜,它穿过死细胞膜的无序区域而到达细胞核,并嵌入细胞的 DNA双螺旋从而产生红色荧光(激发:535 nm,发射:617 nm),因此 PI 仅对死细胞染色。由于 Calcein和PI-DNA 都可被490 nm激发,因此可用荧光显微镜同时观察活细胞和死细胞。用545 nm激发,仅可观察到死细胞。根据以上特点,Calcein, AM和PI 经常被结合用来作为活细胞和死细胞的双重染色。 
      由于不同细胞系的最佳染色条件不同,我们建议个别确定Calcein, AM 和PI的合适浓度。  
操作说明:
     (1)用DMSO 制备1 mM 的Calcein, AM溶液,并用PBS 将其稀释制成1~50μM的Calcein, AM溶液①。
     (2)将1/10 细胞培养基体积的Calcein, AM溶液加入到细胞培养基中②。
     (3)在37℃培养细胞15~30分钟。 
     (4)用PBS 或适当的缓冲液洗涤细胞两次。 
     (5)用490 nm激发波长,515 nm发射波长的滤光片的荧光显微镜观察细胞。 
注意:

      如果Calcein, AM很难进入细胞,可以使用表面活性剂,如Pluronic F127 。 
      也可以用1/10 浓度的Calcein, AM溶液代替培养基。