普通RIPA裂解液(组织/细胞)-蛋白提取/定量-蛋白与免疫

普通RIPA裂解液(组织/细胞)

别名 蛋白提取试剂盒
英文名称 RIPA buffer
储存条件 RIPA裂解液4℃保存,PMSF-20 ℃保存。至少1年
单位

普通RIPA裂解液(组织/细胞)产品配有一支PMSF(100mM,1.5ml)

产品简介:RIPA 组织/细胞裂解液是利用表面活性剂等来裂解细胞膜(包括核膜)。本试剂提取的蛋白为可溶性总蛋白。

使用说明 :

如发现RIPA有沉淀,请放室温半小时或者常温水浴使沉淀溶解。

根据使用量,取每1ml RIPA 加入10ul PMSF,使PMSF的最终浓度为1mM,混匀备用 (PMSF现用现加)。

1、样品前处理:

a)对于贴壁细胞:去除培养液,用 PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍。按照 6 孔板每孔细胞量加入150-250 ul裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下,使裂解液和细胞充分接触。

b)对于悬浮细胞:离心收集细胞,按照6孔板每孔细胞量加入150-250ul裂解液的比例加入裂解液,用手指轻弹悬浮细胞以充分裂解。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多,必需分装成 5-10×105细胞/管,然后再裂解。

c)对于组织样品:把组织剪切成细小的碎片。按照每20mg组织加入150-250ul裂解液的比例加入裂解液

(如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液,如果需要高浓度的蛋白样品,可以适当减少裂解液的用量) 。

用玻璃匀浆器匀浆,直至充分裂解。

2、后处理:

将裂解后的样品10000-14000g离心3-5分钟,取上清,即可进行后续的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。