Bradford法蛋白浓度测定试剂盒
英文名称 | Bradford Protein Assay Kit |
---|---|
储存条件 | 开封使用后请密封保存,本试剂盒自订购之日起九个月内有效。 |
单位 | 盒 |
bradford蛋白定量试剂盒产品内容:
组成 |
包装(2500微孔) |
保存 |
5×G250染色液 |
100ml |
2-8℃ |
PBS稀释液 |
30ml |
2-8℃ |
蛋白标准(5mg/ml BSA) |
1ml |
-20℃ |
产品简介:
考马斯亮兰G-250染料,在酸性溶液中与蛋白质结合,使染料的最大吸收峰的位置(Imax),由465nm变为595nm,在一定的浓度范围内,测定的吸光度值A595与蛋白质浓度成正比。Bradford法测定蛋白浓度不受绝大部分样品中的化学物质的影响,样品中巯基乙醇的浓度可高达1M,二硫苏糖醇的浓度可高达5mM,但受略高浓度的去垢剂影响,需确保SDS的浓度低于0.1%,Triton X-100低于0.1%,Tween 20, 60, 80低于0.06%。含去垢剂的样品推荐使用索莱宝生产的BCA蛋白浓度测定试剂盒。
操作说明:
一.微孔酶标仪法 1. 完全溶解蛋白标准品,取10ul,稀释至250ul ,使终浓度为0.2mg/ml。待测蛋白样品在什么溶液中,标准品也宜用什么溶液稀释。但是为了简便起见,也可以用0.9%NaCl或PBS稀释标准品。 2. 5×G250染色液使用前请颠倒3-5次混匀,取1ml 5×G250染色液,加入4ml双蒸水,混匀成1×G250染色液,此1×G250染色液可在4℃保存一周。 3. 将标准品按0,2,4,6,8,12,16,20微升分别加到96孔板中,加PBS稀释液补足到20微升。 4. 将样品作适当稀释(最好多做几个梯度,如作2倍、4倍、8倍稀释),加20微升到96孔板的样品孔中。由于移液器在取小量时的误差,标准线前面的点可能不很准确,所以尽可能的让样品点落在标准线1/2后。 5. 各孔加入200微升稀释后的1×G250染色液,室温放置3-5分钟。 6. 用酶标仪测定A595,或560-610nm之间的其它波长的吸光度。 7. 根据标准曲线计算出样品中的蛋白浓度。 二.分光光度计法 如无酶标仪,染色反应可在离心管中进行,反应液混匀后加入比色皿中,使用分光光度计测定吸光值。步骤如下: 1. 取八支(或者更多)干净的10ml离心管,标记上号。 2. 取100ulBSA加入PBS 2.4ml稀释至终浓度为0.2mg/ml。 3. 5×G250染色液使用前请颠倒3-5次混匀,取10ml 5×G250染色液,加入40ml双蒸水,混匀成1×G250染色液,此1×G250染色液可在4℃保存一周。
4. 按下表加入试剂(以每孔5ml计,多余的用来清洗比色皿)
离心管号 |
1 |
2 |
3 |
4 |
5 |
6 |
7(样品管1) |
8(样品管2) |
9(样品管3) |
标准蛋白BSA |
0ul |
100ul |
200ul |
300ul |
400ul |
500ul |
500ul适当稀释的样品1 |
500ul适当稀释的样品2 |
…… |
PBS |
500ul |
400ul |
300ul |
200ul |
100ul |
0ul |
0ul |
0ul |
0ul |
1XG250染色液 |
5ml |
5ml |
5ml |
5ml |
5ml |
5ml |
5ml |
5ml |
5ml |
5. 反应3分钟后测OD值。为了实验的准确性,可每间隔2分钟加一管染色液,每间隔2分钟测一管OD值。如下表:
离心管号 |
1 |
2 |
3 |
4 |
5 |
6 |
7 |
8 |
…… |
加染色液(分钟) |
0 |
2 |
4 |
6 |
8 |
10 |
12 |
14 |
…… |
测OD值 |
3 |
5 |
7 |
9 |
11 |
13 |
15 |
17 |
…… |
此图为伯乐酶标仪680,单波长,570nm测得。室温反应三分钟