DNA提取和纯化试剂


DNA提取和纯化试剂

DNA提取和纯化试剂

分子生物学在生命科学领域的发展中发挥着重要的作用,而DNA相关实验正是其核心。在DNA相关实验中,核酸的高效纯化是影响实验结果的重要因素之一。FUJIFILM Wako可提供动物、植物、微生物以及胶回收等的 DNA 提取和纯化试剂。

 

◆DNA提取和纯化的基本操作及原理


DNA的提取和纯化是基因工程和基因分析的第一步,获得尽可能高回收量和高纯度的DNA,关系到后续实验的成功。


DNA提取和纯化试剂


目前,针对各种生物和样品的DNA提取和纯化方法有很多,但基本上是通过以下三个阶段进行的:


● 细胞的裂解

DNA提取和纯化的第一步是细胞的裂解。用表面活性剂、变性剂、强碱等化学处理或热处理裂解细胞膜。对于具有细胞壁的植物和细菌等,需要用酶分解细胞壁或用玻璃磁珠物理破坏细胞壁。

 

● 去除杂质

除 DNA 外,细胞中还含有蛋白质、RNA等各种杂质。蛋白质用变性剂使其变性,或用蛋白酶进行分解。RNA用RNA酶进行分解。此外,通过苯酚提取或苯酚/氯仿提取,使DNA和杂质(蛋白质等)分离。在中性条件下,加入苯酚或苯酚/氯仿后,DNA会被转移至水相,因此只需分离水相即可实现DNA的分离。

除了经典方法之外,日本基因ISOSPIN系列DNA提取试剂盒,利用了DNA在离液离子(胍盐离子等)存在的条件下会吸附于硅胶膜的原理(Boom Technology)。将含有离液离子的结合缓冲液添加至细胞的裂解液,使其通过附在离心柱上的硅胶膜,DNA会吸附在硅胶膜上,而其他杂质直接通过,因此能够有效地去除杂质。

 

● 用乙醇清洗和溶解·洗脱

需要去除残留在DNA 溶液中的盐类和酚类。将乙醇和盐(如钠盐和铵盐等)添加至DNA 溶液并进行离心,可以使DNA沉淀。这是由于盐中和了 DNA 的负电荷,使亲水性高的 DNA 在乙醇下更容易聚集,并且通过离心更容易发生沉淀(乙醇沉淀)。之后,去除乙醇并将DNA沉淀溶解于水或TE缓冲液中,以获得高纯度的DNA。

使用硅胶膜的方法,也可以通过以乙醇为主要成分的洗涤缓冲液来去除盐等。最后,在硅胶膜上加入水或TE缓冲液后,DNA可以从硅胶膜上分离出来,从而洗脱出高纯度的DNA。

◆参考文献


1. 平尾一郎, 胡桃坂仁志 編:「目的別で選べる核酸実験の原理とプロトコール」 (羊土社) (2011).

2. Green, R. M. and Sambrook, J.:”Molecular Cloning A Laboratory Manual, 4th ed.”, Cold Spring Harbor Laboratory Press (2012).

◆产品列表

DNA Extractor® Kit系列(碘化钠法)


产品编号

产品名称

包装

样品

特点

295-50201

DNA Extractor® Kit

50 tests

血清/生物制药中的病毒   DNA

微量DNA的提取

291-50502

DNA Extractor® WB Kit

50 tests

全血(人、牛、马)、培养细胞、组织

可提取基因组DNA

296-60501

DNA Extractor® SP Kit

50 tests

血清/血浆中的基因组   DNA

可去除血源性脂质

296-67701

DNA Extractor® TIS Kit

50 tests

氧化应激标记物   8-OHdG DNA

抑制提取过程中DNA的氧化

295-58501

DNA Extractor® FM Kit

50 tests

头发、指甲、血迹、唾液斑(法医样本)

从痕量样品中提取DNA

mtDNA Extractor® CT Kit

产品编号

产品名称

包装

样品类型

特点

291-55301

mtDNA Extractor® CT Kit

25 tests

组织、细胞和复合饲料的线粒体DNA

 比哺乳动物组织和细胞更

 快更容易提取线粒体   DNA(mtDNA)。还可用

 于从复合饲料中提取线粒体

 DNA。

日本基因  DNA提取试剂(质粒DNA)

产品编号

产品名称

包装

样品类型

特点

318-07991

ISOSPIN Plasmid

100 tests

大肠杆菌

无需苯酚/氯仿

日本基因  DNA提取试剂(PCR产物)

产品编号

产品名称

包装

样品类型

特点

315-08001

ISOSPIN PCR Product

100 tests

PCR产物

 约20min即可纯化PCR产物

蛋白酶K

产品编号

产品名称

包装

样品类型

特点

161-28701

Proteinase K, recombinant, Solution

5 mL

——

——

169-28702

Proteinase K, recombinant, Solution

25 mL

共沉淀剂

产品编号

产品名称

包装

样品类型

特点

318-01793

Ethachinmate

0.02 mL

核酸

醇沉法用共沉淀剂

312-01791

Ethachinmate

0.2 mL

076-06621

20 mg/mL Glycogen Solution

1mL

——

碘化钠法用共沉淀剂

※ 本页面产品仅供研究用,研究以外不可使用。