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分子式：
C27H34I2N4
分子量：
668.39
特点：
● 与死细胞DNA结合
● 常用于细胞凋亡检测
● 可与Calcein-AM或者FDA等荧光探针一起使用
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规格性状
规格
特性：该产品为红棕色粉末或固体，易溶于水和稀盐酸。
水溶性：试验成功
NMR光谱：试验成功
产品概述
荧光染料PI（碘化丙啶）是一种可对DNA染色的细胞核染色试剂，常用于细胞凋亡检测，英文全称是Propidium Iodide。它是一种溴化乙啶的类似物，在嵌入双链DNA后释放红色荧光。尽管PI不能通过活细胞膜，但却能穿过破损的细胞膜而对核染色。PI经常被用来与Calcein-AM或者FDA等荧光探针一起使用，能同时对活细胞和死细胞染色。PI-DNA复合物的激发和发射波长分别为535nm和615nm。
荧光特性
λex=530 nm, λem=620 nm
操作说明
1.用PBS或适当的缓冲液制备10-50μMPI溶液。a）
2.在细胞培养基中加入体积为细胞培养基1/10的PI溶液。b）
3.将细胞在37oC下孵育10-20分钟。
4.用PBS或适当的缓冲液清洗细胞两次。
5.在带有535 nm激发光和615 nm发射滤光片的荧光显微镜下观察细胞。
a）由于PI可能致癌，因此在处理过程中必须格外小心。
b）或者您可以用1/10浓度的PI缓冲溶液代替培养基。
文献
1) I. W. Taylor and B. K. Milthorpe, “An Evaluation of DNA Fluochromes, Staining Techniques, and Analysis for Flow Cytometry. I. Unperturebed Cellpopulations”, J. Histochem. Cytochem., 1980, 28(11), 1224.
2) W. M. J. Vuist, F. V. Buitenen, M. A. De Rie, A. Hekman, P. Ruemke and C. J. M. Melief, “Potentiation by Interleukin 2 of Burkitt’s Lymphoma Therapy with Anti-Pan B (Anti-CD19) Monoclonal Antibodies in a Mouse Xenotransplantation Model”, Cancer Res., 1989, 49, 3783.
3) A. K. El-Naggar, J. G. Batsakis, K. Teague, L. Garnsey and B. Barlogie, “Single- and Double-stranded RNA Measurements by Flow Cytometry in Solid Neoplasms”, Cytometry, 1991, 12, 330.
4) C. Souchier, M. Ffrench, M. Benchaib, R. Catallo and P. A. Bryon, “Methods for Cell Proloferation Analysis by Fluorescent Image Cytometry”, Cytometry, 1995, 20, 203.
5) T. Irino, T. Kitoh, K. Koami, T. Kashima, K. Mukai, E. Takeuchi, T. Hongo, T. Nakahata, S. M. Schuster and M. Osaka, “Establishment of Real-Time Polymerase Chain Reaction Method for Quantitative Analysis of Asparagine Synthetase Expression”, Mol. Diagn., 2004, 6, 217.
常见问题Q&A
| Q1:核染色中所用染料的特征和区别是什么？
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A1： 这里引入的染料具有通过与核酸相互作用而发出荧光或增加荧光强度的特性。 除荧光波长以外的差异如下。 [EB] 它没有碱基特异性，可与所有DNA和RNA结合。 它没有活细胞的膜通透性，并且可以染色死细胞。 [PI] 像EB一样，它没有基础特异性。它是一种更广泛使用的染料，因为插入时它的荧光强度比EB高。 它没有活细胞的膜通透性，并且可以染色死细胞。 [DAPI] 与双链小槽结合。它与腺嘌呤-胸苷簇具有高度结合。 它没有活细胞的膜通透性，并且可以染色死细胞。 [AO] 通过利用插入双链时和与单链磷酸结合时荧光波长不同的事实，可以在双链和单链之间进行区分。 它渗透到活细胞的细胞膜上。 [Hoechst33342，33258] 它与DNA的腺嘌呤胸苷部分特异性结合。 它是一种颜料，可以渗透到活细胞的细胞膜上并染色活细胞的DNA。
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Q2：细胞染料的激发波长和发射波长是多少。 |
| A2： |
| Q3:如何使用PI进行核染色？
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A3:一个例子如下所示。根据细胞类型和观察条件，考虑细胞固定和试剂浓度。 [使用示例①] Vollenweider等人进行了PI染色，并在荧光素激活的杀伤（LAK）细胞增殖试验中使用了荧光板读数器进行了测量。 此时的浓度为0.5 mg / mL PBS（-）。所用浓度为5μg/ mL柠檬酸钠溶液，每孔100μL用于荧光染色。 ·I.Vollenweider，P.Groscurth，J.Immunol.Methods，149，133（1992）。 [用法示例（2）] （1）对于包含实体瘤或团块的样品，请用0.02％tripsin EDTA处理。 在37°C下孵育30分钟后，以1500 rpm进行5分钟，然后弃去上清液。 （2）在-20℃用50％甲醇固定后，以1500rpm进行5分钟，并弃去上清液。 （3）在-20℃下用30％甲醇洗涤后，以1500rpm进行5分钟，弃去上清液。 （4）用0.2 mol / L磷酸盐缓冲液（pH 7.2）洗涤后，以1500 rpm进行5分钟，并弃去上清液。 （5）每106个细胞RNase 0.2 mol / L磷酸盐缓冲液（pH 7.2）溶液（1 mg / mL） 加入0.2 mL，并在37°C下孵育30分钟。 （6）用0.2 mol / L磷酸盐洗涤后，以1500 rpm进行5分钟，并弃去上清液。 （7）加入10 mL PI溶液（50μg/ mL），在黑暗中于4°C染色2小时。 ・医学院出版《流式细胞仪入门》 |