GenomONE^TM-CF

GenomONE^TM-CF EX 仙台病毒包膜细胞融合试剂 

　　GenomONE^TM-CF含有仙台病毒包膜和专用缓冲液，可促使细胞融合。适用于贴壁或者悬浮状态的任何细胞。仅仅需要30分钟就可完成融合细胞及制造混合动力的操作。

◆用途

　　●肿瘤疫苗·癌症免疫研究

　　　癌细胞和树突细胞融合等

　　●再生医疗·细胞治疗研究

　　　脏器来源细胞和干细胞融合等

　　●单克隆抗体的制备

　　　抗原B细胞和髓过氧化物酶细胞融合

　　●分生·分化·育种研究

　　　对脱核未受精卵的核移植（核置换）

　　●其他

　　　PEG&电融合的使用介绍

◆HVJ Envelope（HVJ-E）：

　　HVJ 包膜（HVJ-E）是完全灭活和纯化仙台病毒（HVJ*），即只留下细胞膜融合能力的衣壳蛋白包膜。仙台病毒的HN蛋白可与细胞膜外的唾液酸受体结合，通 过F蛋白的作用，引起细胞膜融合。在HVJ-E中，仙台病毒的基因组RNA已经完全失活，在人类和实验动物体内不存在感染或增殖。因而不需要特殊的操作和 设备，它可以安全地在普通的实验室使用。

*HVJ：日本仙台病毒

◆HVJ-E细胞融合原理

　　在 低温（0 – 8℃)条件下，每一个细胞与数百个以上的HVJ – E接触，HVJ – E与细胞膜上的唾液酸受体结合，通过细胞表面吸附（步骤1），细胞通过HVJ-E相互连接（步骤2），形成细胞彼此聚集的状态。当该细胞/ HVJ-E的复合物加热到37℃时，细胞膜干扰就会进一步扩大，细胞膜内膜结构也暂时改变。这种变化是短暂的，随后会立即返回到正常结构，但是在这个期 间，细胞膜利用强疏水性结合力进行相互融合（步骤3）。

◆应用方法
 

◆悬浮细胞融合案例

同种细胞融合

异种细胞融合

　　荧光标记的红（* 1）细胞和绿色荧光标记（* 2）细胞（每1.0х105个）在融合缓冲液50μL混合后，加入HVJ-E冰敷5分钟，随后37℃下反应15分钟后，融合细胞（黄色）进行了观察。
 

◆黏着态和悬浮态细胞融合案例

在粘合状态BHK-21（红）和在浮动状态（绿色）的P19细胞的融合

胶粘状态的HeLa S3（红）在浮动状态（绿色）的P19细胞的融合

　 　荧光标记的（* 1）中的红，附着的细胞在12孔平板，绿色荧光标记（* 2）中，添加预先准备的HVJ-E，来处理漂浮细胞1×105个的悬浮液（融合缓冲污染），并在室温下离心（1000转），每个板5分钟。随后孵育 37℃15分钟后，更换增殖用的培养基继续细胞培养。观察3个小时后的融合细胞（黄色）。

◆和PEG法的比较

　 　红色荧光标志(* 1）的ratMSC（骨髓由来老鼠间叶系细胞）和绿色荧光标识的老鼠原代培养心肌细胞2×105个融合缓冲液50μL中混合后，添加HVJ – E，冰浴5分钟，然后37℃孵育反应15分钟，观察融合细胞（黄色）。1 – 2日培养后，观察到粘着的融合细胞。在PEG法中融合紧接之后细胞毒性强烈，融合细胞的数量很少。

◆安全性说明

HVJ-E失活的确认（确认无感染性病毒的存在）

　　1、细胞增值实验（荧光灶单元（FFU）法）处理LLC-MK2细胞，一到两天后，病毒生长性的HVJ融合蛋白F抗体通过荧光抗体法测定，已证实未检测到病毒蛋白。<制造阶段实验>

　　2、受精卵生长试验（血凝单位测定）

　　　处理受精卵，3天后的病毒增殖，包括在HVJ表面的HN蛋白的红血细胞聚合活性（HAU）测量作为指标，已经证实，没有看到病毒的生长。<制造阶段实验>

　　3、在小鼠感染性研究

　　　鼻腔给药小鼠和未处理小鼠（SIX周）在相同笼中饲养，通过测定血清中的抗HVJ抗体滴度进行了个体之间感染性的检测。其结果是，在非给药的情况下未观察到抗体滴度增加，表明未感染HVJ-E。

　　4、动物个体的遗传基因导入实验

　　　小鼠、大鼠等实验动物的各种药物实验（肺、气管、肝和静脉等）。已证实完全没有病毒感染或是可疑的事例。