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n501-1
"BINKIT ® NK细胞增殖套装(外周血单核细胞来源)
BINKIT ® for NK cells expansion from PBMCs
BINKIT自然杀伤细胞(NK细胞)扩增培养试剂盒
◆原理
BINKIT 可从外周血单核细胞扩增高活性的自然杀伤(NK)细胞。
◆优点・特色
• 无需饲养层细胞,即可从外周血细胞 (PBMCs)中扩增NK细胞
• 3周时间内NK细胞的数目可扩增几百到几千倍
• NK细胞将获得增强的细胞杀伤性
• 该试剂盒适合20~50mL的外周血细胞
• Xeno-free(不含动物来源的材料)
◆案例・应用
<试剂盒组成>
• NK 细胞初始培养基
• NK细胞初始培养瓶
• NK细胞传代培养基
• BINKIT® 明细表(PDF格式)
<未提供材料>
• Ficoll 淋巴细胞分层液(GE Healthcare)
• 无菌PBS
• FBS或自体血浆(56℃加热30分钟以灭活)
<结果>
图 1 使用BINKIT®进行体外NK细胞扩增
利用BINKIT®对外周血单核细胞进行NK细胞扩增,CD3-CD56+细胞从15.8%增加到88.6%。
图 2 使用BINKIT®进行体外NK细胞扩增
利用BINKIT®对外周血单核细胞(来自健康自愿者,HD, n=3)进行NK细胞扩增。
细胞计数(左)和倍率的变化(右)表明NK细胞体在外高效扩增。
图3 使用BINKIT®进行体外NK细胞扩增
分别以BINKIT扩增的NK细胞(实线)和从3名志愿者新鲜分离的NK细胞(虚线)来检测NK细胞对K562细胞的杀伤性。
结果表明,扩增后的NK细胞对K562细胞杀伤性显著增强(P<0.01)。
<培养步骤>
(1) 准备试剂
在NK细胞初始培养基和NK细胞传代培养基中,加入5% (v/v) 的热灭活FBS或自体血浆。
(2) 制备外周血单核细胞(PBMCs)
通过Ficoll密度梯度离心,从人全血中分离外周血单核细胞。
(3)清洗NK细胞初始培养瓶
加入10毫升PBS至NK细胞初始培养瓶。倾斜培养瓶使PBS覆盖整个表面。
将培养瓶中液体全部倒出,小心以免刮伤培养瓶的表面。重复洗涤过程两次。
(4)从PBMCs中培养NK细胞
将1X 106 cells/mL 的PBMCs 悬浮于NK细胞初始培养基中。每1 mL 细胞悬浮液加入40 uL的NK细胞初始混合物。
细胞悬液转移至预洗涤的NK细胞初始培养瓶,在37℃,5%的CO2培养3天。
(5)更换培养基及传代
同贴壁细胞处理一样,转移时置于锥形离心管,200×g离心8分钟。
去除上清,将1X 106 cells/mL 的NK细胞悬浮于传代培养基中,培养基内加入5ml
转移后的悬浮细胞置于常规培养瓶中,在37℃,5% CO2条件下培养。
每2-3天将 0.8X 106 cells/mL 细胞置于完全NK细胞传代培养基中,进行传代培养。
<建议培养期>
2 – 3 周
注意:试剂仅供科研使用,不可用于临床。产品编号 产品名称 产品规格 N501-1 BINKIT ® for NK cells expansion from PBMCs
BINKIT ® NK细胞增殖套装(外周血单核细胞来源)1 kit N501-2 BINKIT ® for NK cells expansion from PBMCs
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BINKIT ® NK细胞增殖套装(外周血单核细胞来源)8 kits "
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