CYTO-ID® 自噬检测试剂盒-WAKO和光纯药(和光纯药工业株式会社)

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      ENZ-51021-K200

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      CYTO-ID® Autophagy Detection Kit使用新型染料检测自噬小泡和监控活细胞自噬流,选择性标记积累的自噬小泡。染料已通过优化,不染溶酶体,在自噬前体、自噬体和自噬溶酶体里呈现出明 亮的荧光。该试剂盒提供了一种无需细胞转染,可以在活细胞中监控细胞自噬的快速定量方法。

    CYTO-ID® 自噬检测试剂盒-价格-厂家-供应商-WAKO和光纯药(和光纯药工业株式会社)

    CYTO-ID® Autophagy Detection Kit
     

    ◆特点

      ● 无需转染,定量监测活细胞中的自噬情况

      ● 免去LC3-GFP转染所需的时间和精力以及转染效率的验证

      ● 含有特殊基团的专利染料选择性地染色自噬小泡

      ● 试剂盒中包含已知活性的自噬抑制剂与激活剂

      ● 快速量化原生异质性细胞群中的自噬

      ● 选择性地全方位染色,可检测和区分自噬流(autophagic flux)和自噬溶酶体的积累

      ● 不染溶酶体,减少其他染料的背景干扰

      ● 便于高通量筛选自噬激活剂和抑制剂
     

    ◆原理

      该产品所用探针是阳离子两亲性示踪剂(CAT)染料,以类似诱导磷脂药物的方式迅速进入到细胞中。染料的功能基团能够选择性标记与自噬通路相关的小泡,而不会在溶酶体中聚集。

      胞内物质被扩大的膜囊包裹,吞噬泡形成双层膜囊泡,成为自噬体。自噬体外膜随后与溶酶体融合,和内部物质被自噬性溶酶体降解。自噬的各种调节因子也被描绘于图中。

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    自噬原理图

     

    ◆应用

    省时省力,无需转染即可自快速全面的标记自噬小泡

     

      为了演示CYTO-ID® Green detection reagent的优势,先用RFP-LC3表达载体转染HeLa细胞, 10μM的Tamoxifen处理过夜,然后用CYTO-ID® 绿色检测试剂染色。LC3转染法需要过夜,而CYTO-ID® 绿色检测试剂的方法在15-30分钟内标记细胞达100%。图A:绿信号显示自噬小泡的CYTO-ID® 绿染;图B:成功转染细胞的RFP-LC3表达(红色);图C:自噬体的特异性标记LC3,与CYTO-ID® 绿色染料标记的小泡共定位的复合图像。

    的发放

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    无转染的自噬检测

     

      Hela细胞进行饥饿与恢复,然后使用CYTO-ID® Green detection reagent标记。染料可以明确检测和量化自噬及与自噬诱导相关的自噬小泡前体。图1A:稳定表达GFP-LC3的CHO细胞,结果显示对照组与饥饿的细胞群的相对较差的基线分离,自噬难以量化。图1B:CYTO-ID® Autophagy Detection Kit特异性标记LC3蛋白依赖的自噬小泡,免去转染操作。

     

     

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    自噬积累和自噬流的可视化

     

      可用荧光显微镜观察CYTO-ID® 自噬绿色染料检测的自噬液泡积累和自噬流。Hela细胞用以下试剂进行模拟诱导,0.2% DMSO(A)和100μM  Clonidine hydrochloride(B)进行诱导,5μM Loperamide hydrochloride和1 μM PP242 hydrate(D)在37°C诱导12小时。处理后,细胞在37℃下用CYTO-ID® Green Detection reagent孵育10分钟,再用分析缓冲液清洗。细胞核被Hoechst 33342染料复染为蓝色。

     

     

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    避免非特异性溶酶体染色的背景干扰

     

      相比其他MDC染色溶酶体检测,CYTO-ID® 绿色染料无溶酶体染色背景,CYTO-ID® Autophagy kit无需紫外活细胞分析,在显微镜共标记应用中,与Hoechst染料兼容。

     

     

    CYTO-ID® 自噬检测试剂盒-价格-厂家-供应商-WAKO和光纯药(和光纯药工业株式会社)

     

    使用流式细胞仪通过CYTO-ID® Autophagy Detection Kit分析自噬

     

      对照组(红线峰值)无诱导,10 uM Tamoxifen (ALX-550-095)处理Jurkat细胞(白血病T细胞)(蓝线峰值)。处理18小时后,细胞结合CYTO-ID® 绿色检测试剂,然后不经过流式细胞仪清洗,进行分析。结果通过直方图呈现。对照组细胞被染色,但荧光亮度低。实验组中,CYTO-ID® 绿色荧光信号增加约2倍,表明Tamoxifen处理能引起Jurkat细胞中自噬的增加。

     

     

     

    CYTO-ID® 自噬检测试剂盒-价格-厂家-供应商-WAKO和光纯药(和光纯药工业株式会社)

    CYTO-ID® 自噬检测试剂盒-价格-厂家-供应商-WAKO和光纯药(和光纯药工业株式会社)

      使用mTOR激酶抑制剂Rapamycin处理HepG2细胞孵育过夜,结果显示CYTO-ID® 染色信号升高。

     

    CYTO-ID® 自噬检测试剂盒-价格-厂家-供应商-WAKO和光纯药(和光纯药工业株式会社)

     

    CYTO-ID® 绿色染料大多与RFP-LC3蛋白共定位。0.1μM Rapamycin(典型自噬诱导剂)处理过夜,转染Hela细胞表达RFP-LC3。A: CYTO-ID® Green染色; B: RFP-LC3; C: 合成图像。

     

    升级版2.0请关注:http://www.boppard.cn/product/show/735.html

     

     

    ◆相关产品
     

    产品编号

    产品名称

    规格

    备注

    应用

    ENZ-51002-25

    GFP-Certified®Apoptosis/Necrosis detection kit

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    FC,荧光显微镜,荧光检测

    ENZ-51002-100

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    ENZ-51021-K200

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    hromatin condensation detection kit

    细胞核绿色染色体皱缩检测试剂盒

     

    1 Ki

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    FC,荧光显微镜,荧光检测

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    200 µl

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    ENZ-CHM103-0200

    Nuclear-ID®Blue

    DNA stain   (GFP-Certified®)

    Nuclear   ID®蓝色DNA染色(GFP细胞系)

    200 µ

    细胞可渗透的DNA染色应用广泛。

    ≥93%(HPLC),FC,荧光检测

    ENZ-51015-KP002

    Lyso-ID®Red

    cytotoxicity kit   (GFP-Certified®)

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    1 Kit

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    荧光显微镜,荧光检测

    ENZ-51035-0025

    ProteoStat®Aggresome   etection kit

    蛋白内稳态® 聚集体 检测 试剂盒

    25 tests

    Robust、定量的聚集小体用于神经退行性疾病,肝病和毒理学研究

    FC,荧光显微镜,荧光检测

    ENZ-51035-K100

    100 tests

     

    产品编号 产品名称 产品规格
    ENZ-51031-K200 Cyto-ID® Autophagy detection kit CYTO-ID®自噬检测试剂盒 200 tests
    ENZ-51031-0050 Cyto-ID® Autophagy detection kit CYTO-ID®自噬检测试剂盒 50 tests
     

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