CUGA® 7 gRNA合成试剂盒

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  • 货号: 314-08691
    保存条件: 干冰运输
    供应商: 上海金畔生物科技有限公司
    英文名: CUGA7 gRNA Synthesis Kit
    数量: 咨询
    规格: 50次用

    使用CRISPR/Cas9进行基因组编辑的gRNA合成试剂盒CUGA® 7 gRNA合成试剂盒

    CUGA® 7 gRNA Synthesis Kit

     

     

      CUGA® 7 gRNA Synthesis Kit是对CRISPR/Cas9基因组编辑系统所需的向导RNA进行合成和纯化的试剂盒。

      通过使用CUGA® 7聚合酶(独立开发的T7 RNA Polymerase的突变体)进行体外转录,可以精确并且大量制备目的向导RNA。本试剂盒中包含用于体外转录反应的试剂,以及使用核酸纯化柱进行向导RNA纯化用的整套试剂。

     

     

    ◆特点

     

    ● 体外转录反应中可大量地合成gRNA。

    ● 使用专有酶进行精确转录。

    ● 具有与化学合成的gRNA相同的功能。

     

     

    ◆试剂盒组成

     

    <向导RNA合成用试剂>

    CUGA® 7 Enzyme Solution …….. 50 µL×1支

    ・5×Transcription Buffer…………….. 200 µL×1支

    ・0.1 M DTT………………………………. 100µL×1支

    ・NTP Mix …………………………………. 300 µL×1支

    ・DNase I (RNase free)……………… 100 µL×1支

     

     

    <向导RNA纯化试剂和核酸纯化柱>

    ・gRNA Binding Buffer………….. 30 mL×1支

    ・gRNA wash Buffer……………… 40 mL×1支

    ・Spin Column……………………… 50支×1袋

    ・ddWater(RNase free)………… 1 mL×5支

     

    ※注意
    本产品中不包含体外转录反应所需的模板DNA以及模板DNA制备试剂,需另外准备。

     

     

    ◆实验步骤

     

    CUGA® 7 gRNA合成试剂盒

     

     

    ◆实验案例

     

    ①  RNA合成量的比较

    CUGA® 7 gRNA Synthesis Kit(本产品)以及A公司的gRNA合成试剂盒(体外转录法)在37°C,1~4小时的条件下合成single guideRNA(sgRNA)。反应后,根据各个制造商的使用手册纯化sgRNA,比较合成量。

     

    【结果】

    本产品的sgRNA合成量为A公司产品合成量的3倍。

     

    CUGA® 7 gRNA合成试剂盒

     

     

    ②  电泳比较

    使用本产品和A公司的gRNA合成试剂盒合成sgRNA,并通过琼脂糖凝胶电泳比较纯化后的sgRNA。

     

    【实验条件】

    ・电泳样本:37℃反应2小时合成的sgRNA 250ng

    ・电泳凝胶:3% Agarose 21

    ・2×Loading Buffer组成:95%甲酰胺

                 0.5mM EDTA

                 0.005% BPB

                 0.005% XC

     

    【结果】

    本产品合成的sgRNA在电泳中为单一条带,可确认其为精准转录。

     

    CUGA® 7 gRNA合成试剂盒

     

     

    ③  体外切割检验(与化学合成产品比较)

    用本产品合成的sgRNA和化学合成的gRNA(tracrRNA,crRNA)在体外进行切割检验

     

    【实验条件】

    ・M:GeneLadder Fast2 5 µL
    ・C:Control

    ・1:Cas9 Nuclease protein NLS 2 pmol+化学合成的gRNA 2 pmol
    ・2:Cas9 Nuclease protein NLS 2 pmol+本产品合成的sgRNA 50 ng

    ・电泳凝胶:0.8% Agarose S

     

    【结果】

    可确认本产品合成的sgRNA与化学合成的gRNA有相同的功能。

     

    CUGA® 7 gRNA合成试剂盒

     

     

    ◆产品列表

     

    产品编号

    产品名称

    包装

    314-08691

    CUGA® 7 gRNA Synthesis Kit

     CUGA® 7 gRNA合成试剂盒

    50次用

    温馨提示:不可用于临床治疗。