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货号: 314-08691 保存条件: 干冰运输 供应商: 上海金畔生物科技有限公司 英文名: CUGA7 gRNA Synthesis Kit 数量: 咨询 规格: 50次用 使用CRISPR/Cas9进行基因组编辑的gRNA合成试剂盒
CUGA® 7 gRNA Synthesis Kit
CUGA® 7 gRNA Synthesis Kit是对CRISPR/Cas9基因组编辑系统所需的向导RNA进行合成和纯化的试剂盒。
通过使用CUGA® 7聚合酶(独立开发的T7 RNA Polymerase的突变体)进行体外转录,可以精确并且大量制备目的向导RNA。本试剂盒中包含用于体外转录反应的试剂,以及使用核酸纯化柱进行向导RNA纯化用的整套试剂。
◆特点
● 体外转录反应中可大量地合成gRNA。
● 使用专有酶进行精确转录。
● 具有与化学合成的gRNA相同的功能。
◆试剂盒组成
<向导RNA合成用试剂>
・CUGA® 7 Enzyme Solution …….. 50 µL×1支
・5×Transcription Buffer…………….. 200 µL×1支
・0.1 M DTT………………………………. 100µL×1支
・NTP Mix …………………………………. 300 µL×1支
・DNase I (RNase free)……………… 100 µL×1支
<向导RNA纯化试剂和核酸纯化柱>
・gRNA Binding Buffer………….. 30 mL×1支
・gRNA wash Buffer……………… 40 mL×1支
・Spin Column……………………… 50支×1袋
・ddWater(RNase free)………… 1 mL×5支
※注意
本产品中不包含体外转录反应所需的模板DNA以及模板DNA制备试剂,需另外准备。◆实验步骤
◆实验案例
① RNA合成量的比较
用CUGA® 7 gRNA Synthesis Kit(本产品)以及A公司的gRNA合成试剂盒(体外转录法)在37°C,1~4小时的条件下合成single guideRNA(sgRNA)。反应后,根据各个制造商的使用手册纯化sgRNA,比较合成量。
【结果】
本产品的sgRNA合成量为A公司产品合成量的3倍。
② 电泳比较
使用本产品和A公司的gRNA合成试剂盒合成sgRNA,并通过琼脂糖凝胶电泳比较纯化后的sgRNA。
【实验条件】
・电泳样本:37℃反应2小时合成的sgRNA 250ng
・电泳凝胶:3% Agarose 21
・2×Loading Buffer组成:95%甲酰胺
0.5mM EDTA
0.005% BPB
0.005% XC
【结果】
本产品合成的sgRNA在电泳中为单一条带,可确认其为精准转录。
③ 体外切割检验(与化学合成产品比较)
用本产品合成的sgRNA和化学合成的gRNA(tracrRNA,crRNA)在体外进行切割检验
【实验条件】
・M:GeneLadder Fast2 5 µL
・C:Control・1:Cas9 Nuclease protein NLS 2 pmol+化学合成的gRNA 2 pmol
・2:Cas9 Nuclease protein NLS 2 pmol+本产品合成的sgRNA 50 ng・电泳凝胶:0.8% Agarose S
【结果】
可确认本产品合成的sgRNA与化学合成的gRNA有相同的功能。
◆产品列表
产品编号
产品名称
包装
314-08691
CUGA® 7 gRNA Synthesis Kit
CUGA® 7 gRNA合成试剂盒
50次用
温馨提示:不可用于临床治疗。