| 产品编号 | 产品名称 | 产品规格 | 产品等级 | 产品价格 |
| 290-80801 | CUBIC Trial Kit CUBIC试剂盒试用装 |
1 Kit | 组织透明化试剂 |
- 产品特性
- 相关资料
- Q&A
- 参考文献
CUBIC 组织透明化试剂
具有单细胞分辨率的全脑/全身成像
|
＊数据由Etsuo A Susaki博士和 Hiroki R. Ueda, RIKEN博士提供 |
Hiroki R. Ueda博士等人开发了一种简单、高效、可扩展的脑/体透明化方法和成像/计算分析方法，CUBIC（clear, unobstructed brain/body imaging cocktails and computational analysis）。 CUBIC是一种基于亲水溶液（ScaleCUBIC Solutions）的、具有荧光保护、高性能及无需特殊设备等特点的组织透明化方法。 它可以利用LSFM技术实现可重复的整个器官和全身的透明化以及快速3D成像。CUBIC还提供3D图像的处理和分析，以提取生物信息。 所以，CUBIC提供了具有单细胞分辨率和图像信息学的全器官/全身成像平台，使广大用户能够针对细胞和器官层进行多个样品的实验。 |
◆CUBIC的优点
● 易于使用
● 无需特殊设备
● 支持后续的2D H＆E染色
● 高透明度
● 适用于多种器官
● 兼容IF（免疫荧光），FP（荧光蛋白）和其他荧光标记
◆CUBIC的应用
**一般情况下，可使用比例为7:3的固定溶液1和2（RI~1.49）混合溶液。
图1．使用Scale CUBIC Solution透明化前后小鼠整体器官的透射图像
图2．使用Scale CUBIC Solution透明化前后小鼠2mm切片的透射图像
◆ CUBIC应用于荧光蛋白表达
图3．CAG-EGFP Tg小鼠（8w雄性）的全脑，全心脏和解剖肝脏的LSFM成像
◆CUBIC应用于病理学方法中
数据来源于S. Nojima.et al. : Scientific Reports ,7,9269 (2017)/已被收录
图4．使用CUBIC透明化各种人体器官
使用CUBIC的石蜡样品的组织透明化和3D成像
图5．使用CUBIC的病理标本的组织透明化和3D成像
◆CUBIC 鱼类透明化案例
数据提供：东京海洋大学 海洋生物资源学院 二见邦彦老师
图6．使用CUBIC的鱼类透明化案例
实验步骤参见参考文献5）
图7．使用CUBIC处理后的鱼类内脏切片案例
-CUBIC处理后，切片5 μm，可用Mayer’s Hematoxylin染色-
图8．用抗体观察CUBIC处理后斑马鱼鳃的内脏片
◆CUBIC 甲壳类（螃蟹·鼠妇）透明化案例
数据提供：浜松医科大学 医学分光应用寄附研究生 绀野在老师，冈崎茂俊老师
图9．使用CUBIC的甲壳类透明化案例（上：螃蟹，下：鼠妇）
实验步骤参见参考文献6）
图10．观察CUBIC处理后（PI染色）甲壳类的全身（左：螃蟹，右：鼠妇）
实验步骤参见参考文献6）
注意：
列出的产品仅供实验室研究使用，不得用于药物、食品或人体。
组织透明化配套耗材：成像用透明室
相关资料
透明化试剂方法选择流程.pdf
CUBIC trial manual.pdf
组织透明化试剂Q&A ver1.0
Tissue clearing reagent Q&A ver1.0
Q：组织透明化的原则
Ａ：组织透明化通常是按下面的步骤进行的：
Ａ：（a）固定 （b）透化 （c）脱色 （d）折射率匹配
Q：组织透明化的优势
Ａ：目前大多数可用的透明化技术，都是通过编码荧光报告蛋白或者用荧光标记抗体进行后标记，从而可视化
Ａ：组织中特定的蛋白。组织透明化成为了具有单细胞分辨率的组织3D成像中重要的一环。
Q：透明化技术的比较
Ａ：下面是水性的透明化技术。
Ａ：SeeDB（基于果糖的方法）在一些应用中有一定优势。因为SeeDB不含去垢剂，所以对于透明化DiI(细胞膜
Ａ：红色荧光探针，一种神经示踪剂)标记的样品和使用光电关联显微镜（CLEM）的情况下，SeeDB有着一定优
Ａ：势。另外SeeDB会产生自体荧光，有时候会对辨认未标记的神经元结构（如神经毡）起着一定帮助。
Ａ：SeeDB2是为使用高NA物镜的高分辨率成像而优化的技术；因此，当处理较大的组织时，CLARITY或者CUBIC
Ａ：会是更好的选择。
Q：切片厚度的最大值和最小值？
Ａ：您应该根据您的物镜的WD（工作距离）来决定切片的厚度。我们建议切片的厚度不要超过3mm。对于十分薄
Ａ：且脆弱的样品，我们建议使用琼脂糖包埋。
Ａ：使用CUBIC，可以让全器官、全身透明化和使用LSFM的快速3D成像具有可重复性。
Q：试剂盒成分
Ａ：具体如下：
Ａ：1. SCALEVIEW-S试剂盒（299-79001）适用于20份1-2mm的切片样品
Ａ：Ａ：1） SCALEVIEW-S0——100mL
Ａ：Ａ：2） SCALEVIEW-S1——100mL
Ａ：Ａ：3） SCALEVIEW-S2——100mL
Ａ：Ａ：4） SCALEVIEW-S3——100mL
Ａ：Ａ：5） SCALEVIEW-S4——100mL
Ａ：Ａ：6） SCALEVIEW-SMT——100mL
Ａ：2. SCALEVIEW-S试剂盒（290-80801）适用于20-30份1-2mm的切片样品。
Ａ：Ａ：1） SCaleCUBIC-1 Solution——250mL
Ａ：Ａ：2） SCaleCUBIC-2 Solution——250mL
Ａ：Ａ：3） Mounting Solution 1——40mL
Ａ：Ａ：4） Mounting Solution 2——40mL
Ａ：3. SeeDB试剂盒（299-79901）适用于20-30份1-2mm的切片样品。
Ａ：Ａ：1） SeeDB：20w/v% Fructose Solution——50mL
Ａ：Ａ：2） SeeDB：40w/v% Fructose Solution——50mL
Ａ：Ａ：3） SeeDB：60w/v% Fructose Solution——50mL
Ａ：Ａ：4） SeeDB：80w/v% Fructose Solution——50mL
Ａ：Ａ：5） SeeDB：100w/v% Fructose Solution——50mL
Ａ：Ａ：6） SeeDB——50mL
Ａ：4. SeeDB2试剂盒（294-80701）适用于20-30份1-2mm的切片样品。
Ａ：Ａ：1） Saponin（皂角苷）——5g
Ａ：Ａ：2） SeeDB2G solution——50mL
Ａ：Ａ：3） SeeDB2S solution——50mL
Ａ：Ａ：4） PBS——50mL
Q：样品的保存
Ａ：SCALEVIEW-S处理的样品应在室温下保存2至3周。您可以在2至3周内观察SCALEVIEW-S透明化的样品中的
Ａ：荧光信号。
Ａ：CUBIC处理的样品应在室温下保存1周。您可以在1周内观察CUBIC透明化的样品中的荧光信号。
Ａ：SeeDB2G处理的样品应在冰箱中保存1年，而SeeDB2S处理的样品则可在室温下保存1年。您可以在1年内观
Ａ：察SeeDB透明化的样品中的荧光信号。
Q：抗体的荧光标记
Ａ：应在进行透明化前就进行抗体的荧光标记。
Q：适用于SCALEVIEW-S的显微镜
Ａ：SD-OSR（Olympus）
Ａ：FV-OSR（Olympus）
Q：适用于CUBIC的显微镜
Ａ：SD-OSR（Olympus）
Ａ：FV-OSR（Olympus）
Ａ：Zeiss Lightsheet Z.1（Carl Zeiss）
Q：适用于SeeDB2的显微镜
Ａ：Confocal（最好使用高NA的油浸镜头）
Ａ：STED（Leica Microsystems）
Ａ：SR-SIM（Carl Zeiss）
Ａ：SD-OSR（Olympus）
Ａ：FV-OSR（Olympus）
Ａ：Airyscan（Carl Zeiss）
Ａ：HyVolution（Leica Microsystems）
Ａ：Two-photon（最好使用复合浸没镜头）
Ａ：Confocal（最好使用高NA的甘油浸镜头）
Ａ：Light-sheet DLS（Leica，最好使用定制镜面的设备）
Q：重构
Ａ：对于定量用途，我们建议使用Neurolucida系统（MBF）。我们同样测试了VAST Lite用于成像用途时的表
Ａ：现。重构时也可以使用开源软件。例如，Vaa3d可以处理大量的拼接图像的数据。
Q：物镜推荐
Q：其他物种？其他器官？
Ａ：对于昆虫样品和鱼类样品，建议选择CUBIC。
Ａ：昆虫相关文献：Ohuma.et al.: Fish Pathology, 52(2), 96(2017).
Ａ：鱼类相关文献：Konno and S.Okazaki .: Zoological Letters, 4:13(2018).
对于多细胞球状体，选择SCALEVIEW-S会更好。
https://www.nature.com/articles/s41598-018-29169-0
参考文献
[1] E. A. Susaki.et al. : Cell ,157(3),726(2014).
[2] K. Tainaka.et al. : Cell ,159(4),911(2014).
[3] E. A. Susaki.et al. : Nature Protocols ,10,1709(2015).
[4] S. Nojima.et al. : Scientific Reports ,7,9269 (2017).
[5] S. Ohnuma. et al.: Fish Pathology, 52(2), 96(2017).
[6] A. Konno and S. Okazaki.: Zoological Letters, 4:13(2018).
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