食品分析用

 α-葡萄糖苷酶活性抑制检测试剂盒

　　淀粉分解产生二糖，α-葡萄糖苷酶能分解二糖产生葡萄糖，使血液中的血糖升高。因此，可通过抑制α-葡萄糖苷酶来抑制血糖升高。

　　近来有研究表明从不同的植物体中可以检测到α-葡萄糖苷酶抑制物质，研究人员致力于将其应用到抑制血糖升高功能性食品的研究。

　　α-葡萄糖苷酶活性抑制检测试剂盒能测定对α-葡萄糖苷酶的抑制作用。与LabAssay™ 葡萄糖（血糖）检测试剂盒配套使用，可用于检测食品等成分中对α-葡萄糖苷酶活性抑制作用。

◆试剂盒组成

试剂名称	容量	数量	主要成分
酶试剂	1mL	2	α-葡萄糖苷酶
缓冲剂	50mL用	2	马来酸/顺丁烯二酸二钠
基质液1	20mL用	2	D-(+)-麦芽糖
基质液2	20mL用	2	蔗糖
阳性对照	100mg	1	阿卡波糖

*阿卡波糖是一种新型口服降糖药。在肠道内竞争性抑制葡萄糖苷水解酶。降低多糖及蔗糖分解成葡萄糖，使糖的吸收相应减缓，因此可具有使饭后血糖降低的作用。

◆除试剂盒外所需器具、器材

　　●　LabAssay™ 葡萄糖（血糖）检测试剂盒

　　●　96孔透明微孔板

　　●　酶标仪（505 nm吸光度）

　　●　微量移液管

　　●　恒温槽（37℃）

◆实验操作流程

◆检测步骤

Ⅰ．配制试剂

决定稀释倍数的预实验

	麦芽糖	蔗糖
基质溶液	麦芽糖溶液 50μL	蔗糖溶液 50μL
纯净水	25μL
37℃，3分钟

（葡萄糖定量）

　　１．6孔微孔板中分别加入100μl的酶反应液和稀释的葡萄糖标准液（浓度：15,10,5,2.5mg/dl）添加150μLLabAssay™ Glucose显色剂，充分混合。

　　２．37℃下进行10分钟温育，测定505nm的吸光度。

　　３．麦芽糖的葡萄糖生成量为10mg/dL，蔗糖为5mg/dL，以此求稀释倍率。

 

Ⅱ．正式试验（酶反应）

＜样品配制＞

	麦芽糖	蔗糖
基质溶液	麦芽糖溶液 50μL	蔗糖溶液 50μL
样品溶液或阳性对照溶液   （对照组是纯净水）	25μL
37℃，3分钟
酶稀释液	酶稀释液25μL（根据预实验决定稀释倍数）	酶稀释液25μL（根据预实验决定稀释倍数）
搅拌后，37℃下，准确反应30分钟
纯净水	400μL
立即在沸水中加热3分钟后，冷却

 

＜空白对照配制＞

	麦芽糖	蔗糖
基质溶液	麦芽糖溶液 50μL	蔗糖溶液 50μL
样品溶液或纯净水	25μL
纯净水	400μL
酶稀释液	酶稀释液25μL（根据预实验决定稀释倍数）	酶稀释液25μL（根据预实验决定稀释倍数）
立即在沸水中加热3分钟，冷却

Ⅲ．葡萄糖定量

　　→同预试验，使用LabAssay™ 葡萄糖（血糖）检测试剂盒测定。

Ⅳ．IC50计算

　　１．以对照溶液的葡萄糖生成量为α-葡萄糖苷酶的100%活性，通过各浓度样品溶液的葡萄糖生成量，求α-葡萄糖苷酶比活性；

　　２．以样品或阳性对照溶液浓度（酶反应液中的终浓度）为横轴，以α-葡萄糖苷酶比活性为纵轴绘制半对数线图，从得出的近似曲线算出比活性50%时样品的浓度（IC50值）。

 

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