生物体组织透明化新技术-SCALEVIEW®-A2
宮脇敦史博士等人开发了一种水溶状态下不会损坏荧光蛋白，可简便使生物体组织透明化的方法。对于福尔马林固定的样本，SCALEVIEW®-A2是不破坏其光吸收和荧光，同时可减少光散射的水溶性溶液。仅需将哺乳类动物大脑等生物体组织浸泡于SCALEVIEW®-A2中，即可透明化。

生物体组织透明化新技术-SCALEVIEW®-A2

　　宮脇敦史博士等人开发了一种水溶状态下不会损坏荧光蛋白，可简便使生物体组织透明化的方法。
　　对于福尔马林固定的样本，SCALEVIEW^®-A2是不破坏其光吸收和荧光，同时可减少光散射的水溶性溶液。仅需将哺乳类动物大脑等生物体组织浸泡于SCALEVIEW^®-A2中，即可透明化。
　　SCALEVIEW^®-A2光学特性——折射率ne（20℃）为1.377-1.381。
HP数据：理化学研究所 脑科学综合研究中心细胞机能探索技术开发小组滨裕、宮脇敦史提供
合作：奥林巴斯（Olympus）株式会社
参考文献：Hama,H.et al. : Nature Neuroscience 14, 1481(2011).

◆SCALEVIEW^®-A2 操作例

以透明化小鼠大脑为样本，SCALEVIEW^®-A2透明化方法操作如下：

1. 固定

① 用4% 多聚甲醛（PFA）/PBS（pH 7.5～8.0）对小鼠进行灌流固定。

② 取出小鼠大脑后，用4%PFA/PBS固定（4℃、10h）， 20% 蔗糖/PBS置换（4℃、24h）。

③ 用OCT复合物对小鼠大脑进行包埋处理后，液氮进行冷冻。

④ 用PBS对冷冻脑组织解冻、清洗后，再用4% PFA/PBS进行再固定（室温、20min）

2. 透明化处理

⑤ 将固定好的小鼠大脑浸泡在SCALEVIEW^®-A2中（室温）。

注意点：
１．每个成年小鼠大脑需要使用30mL以上的SCALEVIEW^®-A2。

２．透明化需要1周以上时间。浸泡过程中，需在混匀器等设备中慢慢轻晃溶液。每天更换一次

２．SCALEVIEW^®-A2溶液，效果更佳。

３．通过SCALEVIEW^®-A2溶液浸泡后，小鼠大脑体积会单方向膨胀10~30%水平。

 

3. 观察

⑥ 观察SCALEVIEW^®-A2处理后的小鼠大脑样品使用双光子激光显微镜、奥林巴斯（Olympus）公司

XLPLN25SVMP多光子专用物镜。或使用激光共聚焦显微镜进行观察。

⑦ 观察结束后，可将小鼠大脑再次浸泡于SCALEVIEW^®-A2溶液中，保存温度4℃。

 

◆SCALEVIEW^®-A2处理案例

图1. SCALEVIEW^®-A2透明化小鼠大脑案例

从左往右： SCALEVIEW^®-A2处理前的小鼠大脑；SCALEVIEW^®-A2浸泡两周后的小鼠大脑

◆SCALEVIEW^®-A2观察案例

图2. 双光子激光显微镜下获取的Thy1-H小鼠大脑深层观察图像

使用奥林巴斯（Olympus）公司XLPLN25XWMP多光子专用物镜观察图像

比例尺：50μm

图3. 双光子激光显微镜下获取的Thy1-H小鼠大脑深层观察图像

使用奥林巴斯（Olympus）公司XLPLN25XSVMP（NA.1.0 WD4mm）多光子专用物镜观察图像

 

图4. 激光共聚焦显微镜下获取的小鼠胰脏透明化图像

对小鼠进行灌流固定处理前，先使用Lectin Texas red对流入血管进行标记处理。灌流固定后，取出胰脏并用SCALEVIEW^®-A2进行处理。图为奥林巴斯（Olympus）公司物镜：UPLSAPO30XS观察下的图像。生物体组织透明化新技术-SCALEVIEW®-A2

 

◆相关视频（欲观看视频请点击文字）

YFP-H小鼠海马部成像视频

使用奥林巴斯（Olympus）公司XLPLN25XSVMP（NA1.0,WD4mm）多光子专用物镜观察图像

YFP-H小鼠大脑的成像视频

使用奥林巴斯（Olympus）公司XLSLPLN25XSVMP（NA0.90,WD8mm）多光子专用物镜观察图像

 

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金畔–