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Alkaline Phosphatase Labeling Kit – SH试剂盒货号:LK13
碱性磷酸酶标记试剂盒-巯基
Alkaline Phosphatase Labeling Kit – SH
商品信息
储存条件:0-5度保存
运输条件:室温

特点:

● 可以在大约3个小时内制备ALP标记的产品。

● 可以标记高分子量化合物(MW> 50,000)和低分子量化合物(MW <5,000)。

● 可以标记50至200μg的蛋白质。

● 只需与SH反应性ALP混合即可形成ALP标签。

● 还可以通过使用附着的还原剂标记不具有游离SH基团的蛋白质。

● 可以通过使用过滤管的分离操作以高回收率获得标记物质。

● 带有ALP标签的产品可以与随附的存储溶液一起存储。

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蛋白抗体标记检测方案

Alkaline Phosphatase Labeling Kit &#8211; SH试剂盒货号:LK13 碱性磷酸酶标记试剂盒-巯基

试剂盒内含
产品概述
原理
操作步骤
产品优势
常见问题Q&A

试剂盒内含

Alkaline Phosphatase Labeling Kit &#8211; SH试剂盒货号:LK13 碱性磷酸酶标记试剂盒-巯基

产品概述

该试剂盒主要用于制备酶免疫分析 (EIA) 所需的碱性磷酸酶标IgG以及竞争性EIA所需的碱性磷酸酶标抗原。该试剂盒中的SH-reactive ALP能够与含有SH的蛋白质或者其他分子反应。该试剂盒包含了标记过程中所需的全部试剂,包括还原剂和储存用缓冲液。SH-reactive ALP可以和靶分子形成共价键,还原剂能够在IgG分子上建立自由巯基。当碱性磷酸酶标IgG用于EIA时,SH-reactive ALP的高效性足以使它在标记后省去纯化的过程。即使在标记后需要有一个高纯度的精制过程,也只要用亲和柱或凝胶渗透柱就能简单达到目的。在标记小分子的时候,使用试剂盒中包含的过滤管即可除去分子量较大的分子。

* ALP:Alkaline Phosphatase (碱性磷酸酶)

原理

Alkaline Phosphatase Labeling Kit &#8211; SH试剂盒货号:LK13 碱性磷酸酶标记试剂盒-巯基

操作步骤

使用注意事项:

1. 所需标记的较大的蛋白质的分子量要>50,000。

2. 所需标记的较小的氨基化合物的分子量要<5,000。

3. 标记过程中,标记前后的IgG总是在过滤管的滤膜上。

4. 如果IgG溶液含有其它分子量超过10,000的蛋白质,如BSA或凝胶,在使用该试剂盒标记前请先纯化IgG溶液。IgG溶液能够使用IgG纯化试剂盒来纯化 (不包含于此试剂盒中)。

5. 如果IgG溶液中含有小的不溶物,离心后提取上清液来标记。

6. 如果长时间不使用,建议您把试剂盒中的酶SH-reactive ALP放在-20℃冰箱中保存,不需要充氮气,可以更好地保持酶的活性,但请不要把其它试剂和过滤管放到-20℃冰箱中,仍请放在0-5℃冰箱中保存。

标记IgG操作步骤:

(1)将100μl Solution A以及含有50-200μg IgG的样品溶液加入到过滤管中。a)

(2)用移液器使溶液混合,8,000-10,000g离心10分钟。b)

(3)将150μl Solution A加入到Reducing agent中并用移液器吹打使其溶解。

(4)将100μl步骤3所得溶液转移到IgG所集中的过滤管的滤膜上。

(5)用移液器吹打数次,然后在37℃下培养30分钟。

(6)将100μl Solution B加入到过滤管中,8,000-10,000g离心10分钟。除去滤液,加入200μl Solution B,再离心一次。b)

(7)将50μl Reaction buffer加入到SH-reactive ALP中并用移液器吹打使其溶解。

(8)将SH-reactive ALP溶液移到被还原的IgG所集中的过滤管的滤膜上。

(9)用移液器吹打数次,然后在37℃下培养1小时。

(10)加入150μl Storage buffee并吹打10-15次来回收标记产物。c)将此溶液转移至一支0.5ml的试管,将其储存在0-5℃。d)

Alkaline Phosphatase Labeling Kit &#8211; SH试剂盒货号:LK13 碱性磷酸酶标记试剂盒-巯基

a)推荐的IgG的量为100μg,样品溶液的体积不应超过100μl。如果抗体浓度低于0.5mg/ml,重复步骤1和2直至总的IgG聚积量达到50-200μg。

b)如果溶液在离心后仍然残留在膜上,可以再离心5分钟或者适当增加转速。

c)标记产物的浓度为0.5-1.3mg/ml。在进行后续的酶免疫,免疫印迹,免疫转染试验前先要将标记后的IgG稀释至适当的浓度。每个还原后的IgG分子上被标记上2到4个碱性磷酸酶分子。没有被结合的碱性磷酸酶不会干扰正常的免疫试验。如果一定要纯化的话,可以使用凝胶渗透柱或亲合柱。

d)通常碱性磷酸酶标记后的还原型IgG在Storage buffer中,0-5℃下至少能够保存2个月,如果需要保存更久,可以在-20℃下存放。但还要注意样品自身是否稳定。

标记小分子操作步骤:

(1)用Reaction buffer制备50μl,1mM的巯基化合物溶液,a)并将该溶液加入到SH-reactive ALP管中。吹打数次使其充分混合,然后置于37℃下培养1小时。

(2)将100μl Solution A加入到反应液中并将整个溶液全部移入过滤管中。

(3)在8,000-10,000g离心10分钟,b)弃滤液,向管中加入200μl Solution A。再重复该过程一次,然后再在8,000-10,000g离心10分钟。b)

(4)加入200μl Storage buffer并用移液器吹打10到15次来回收标记产物。c)将溶液转移至0.5ml的试管中,并储存于0-5℃下。d)

Alkaline Phosphatase Labeling Kit &#8211; SH试剂盒货号:LK13 碱性磷酸酶标记试剂盒-巯基

a)如果巯基化合物在水溶液中无法溶解,可以用DMSO使其溶解,制备成10mM的溶液,取5μl与45μl Reaction buffer混合。

b)如果溶液在离心后仍然残留在膜上,可以再离心5分钟或者适当增加转速。

c)标记后产物的浓度大约为400-500μg/ml(10-12.5μM)。1-2个靶分子能够和1个碱性磷酸酶分子结合。

d)建议用Storage Buffer来回收标记产物,也可以选择其它合适的缓冲液。

产品优势

1)可以在大约3个小时内制备ALP标记的产品。

2)可以标记高分子量化合物(MW> 50,000)和低分子量化合物(MW <5,000)。

3)可以标记50至200μg的蛋白质。

4)只需与SH反应性ALP混合即可形成ALP标签。

5)还可以通过使用附着的还原剂*标记不具有游离SH基团的蛋白质。

6)可以通过使用过滤管的分离操作以高回收率获得标记物质。

7)带有ALP标签的产品可以与随附的存储溶液一起存储。

常见问题Q&A

Q1: 能够使用这个试剂盒标记F(ab’)2吗?
A:可以标记。请参照标记IgG的操作说明,回收率通常都超过80%。
Q2:能够用这个试剂盒标记其他蛋白质或者多肽吗?
A:可以,只要标记分子的还原型分子量>50,000或者<5,000且具有活性巯基结构。如果分子量>50,000,参照IgG的标记操作说明,使用0.5-1 nmol蛋白样品来标记。如果分子量<5000,参照标记小分子的操作说明。如果分子量>5,000且<50,000,请咨询我们的客户服务。Email:info@dojindo.cn 免费电话:800-988-0083
Q3: 能够使用这个试剂盒标记寡核苷酸或者寡肽吗?
A:可以,只要它的分子量<5,000且具有活性巯基。可以参照标记小分子的操作说明。
Q4: LK13所能标记的最小的IgG的量是多少?
A:最小量为50 μg。标记50 μg与200 μg之间的IgG,在灵敏度和本底上没有太大的区别。但是,在步骤8,使用SH-reactive ALP溶液时,用量缩小为原来的1/5,还是能够标记10 μg的IgG。
Q5: 每个IgG能够标记多少碱性磷酸酶分子?
A:每个IgG平均能标记上1-2个碱性磷酸酶分子。
Q6: 标记蛋白质之前是否必须先使用过滤管?
A:如果蛋白溶液中不含有带有活性巯基的小分子并且蛋白浓度在10 mg/ml或者70 μM左右,则没有必要使用过滤管。只需要将样品溶液和Solution B混合,再把混合液加入到SH-reactive ALP管中即可。
Q7:是否必须要使用试剂盒所包含的Storage Buffer?
A:不一定要使用试剂盒所包含的Storage Buffer。可以选择任何适用于该试验的缓冲液。
Q8:我的样品中含有小的不溶物,我该怎么办?
A:低速离心后用上清液来标记。
Q9:标记反应结束后,未标记的SH-reactive ALP是否仍然含有活性马来酰亚胺?
A:不含有。几乎100%的SH-reactive ALP都被用于了IgG或者小分子的标记。
Q10:Storage Buffer中是否含有动物产品或者高分子聚合物?
A:Storage Buffer中不含有任何动物产品,高分子聚合物或者重金属离子。