亲和标签抗体结合磁珠重组蛋白纯化用 | 日本关东化学官网日本柴田科学官网日本天野酶官网

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亲和标签抗体结合磁珠重组蛋白纯化用

重组蛋白纯化用

亲和标签抗体结合磁珠

亲和标签抗体结合磁珠重组蛋白纯化用

◆抗DYKDDDDK tag抗体磁珠

　　已固定识别DYKDDDDK肽单抗的磁珠悬浮液。可用于检测大肠杆菌、酵母、哺乳动物表达的DYKDDDDK标签融合蛋白。

特点

●　非特异性结合少

●　可回收N端、C端、Internal全部蛋白

●　可用DYKDDDDK肽、SDS溶液洗脱

●　无需离心处理，可减少样品损耗，简单替换溶液

1. 抗DYKDDDDK标签抗体磁珠的性能

亲和标签抗体结合磁珠重组蛋白纯化用
可在不依赖标签位置的情况下，回收重组蛋白。

把各DYKDDDDK tag融合蛋白分别加入细胞溶解液中进行免疫沉淀后，通过Western blotting比较抗原回收量。

经4%SDS样品缓冲液洗脱和SDS-PAGE后，用Western blotting法，加过氧化酶标签抗体（产品编号：015-22391）进行发光检测。

M : 标签蛋白
Met : N-terminal Met-DYKDDDDK-BAP
N : N-terminal DYKDDDDK-BAP
C : C-terminal DYKDDDDK-BAP

2. 洗脱法比较抗原回收性能

亲和标签抗体结合磁珠重组蛋白纯化用
SDS和DYKDDDDK肽均能洗脱抗原

将DYKDDDDK标签融合蛋白加入细胞溶解液中，分别加入磁珠吸附后，利用各种洗脱法回收抗原量并用Western Blotting法进行比较。

用过氧化酶标签抗体（产品编号：015-22391）进行发光检测。

M：Marker蛋白
Lane1：添加2×SDS sample buffer后，煮沸
Lane2：DYKDDDDK peptide(200 μg/mL)
Lane3：4% SDS solution

3. 非特异性吸附蛋白的比较

亲和标签抗体结合磁珠重组蛋白纯化用

在不含DYKDDDDK tag的细胞溶解液中分别添加磁珠并进行免疫沉淀后，比较非特异性吸附蛋白。

用4%SDS样品缓冲液洗脱、电泳后，用银染色、抗小鼠IgG、过氧化酶标签抗体进行Western Blotting比较。

无法检测出非特异性吸附质。

产品名称	子类克隆号	规格	产品编号	包装
DYK标签：DYKDDDK
抗DYKDDDDKtag抗体磁珠 Anti DYKDDDDK tag Magnetic Beads	小鼠 IgG_2b 1E6	免疫化学用	011-25154	200 μL
			017-25151	2.5 mL
			013-25153	2.5 mL×5
溶液组成：10 mg/mL Anti-DYKDDDDK Magnetic Beads, 1×TBS(pH 7.4), 50 w/v % glycerol, 0.05 w/v % 　　　　　 sodium azide

◆相关产品

内参照

下表为Western Blot实验中参照用单抗一览表。

产品名称	规格	产品编号	包装
抗β肌动蛋白单抗 Anti β-Actin, Monoclonal Antibody	免疫化学用	013-24553	200 μg
		011-24554	1 mg
		017-24556	5 mg
抗β肌动蛋白单抗,过氧化物酶标记 Anti β-Actin, Monoclonal Antibody, Peroxidase Conjugated	免疫化学用	017-24573	200 μL
抗α-微管蛋白, 单抗 Anti α-Tubulin, Monoclonal Antibody	免疫化学用	011-25034	10 μg
		017-25031	200 μg
		013-25033	1 mg
Anti β-Tubulin, Monoclonal Antibody 抗β-微管蛋白, 单抗	免疫化学用	018-25044	10 μg
		014-25041	200 μg
		010-25043	1 mg
Anti GAPDH, Monoclonal Antibody 抗GAPDH, 单抗	免疫化学用	016-25523	200 μg
		014-25524	1 mg
		010-25526	5 mg
Anti GAPDH, Monoclonal Antibody, Peroxidase Conjugated 抗GAPDH, 单抗, 过氧化酶结合	免疫化学用	015-25473	200 μL

蛋白酶抑制剂系列

产品名称	规格	产品编号	包装
蛋白酶抑制剂混合物试剂盒 I，无动物源成分（通用型） Protease Inhibitor Cocktail Set I, Animal-derived-free (for general use) (×100), Lyophilized	通用型	165-26021	1 mL用
	通用型	161-26023	1 mL用×5
蛋白酶抑制剂混合物试剂盒III, DMSO溶液（不含EDTA）（×100） Protease Inhibitor Cocktail Set III, DMSO Solution (EDTA free) (×100)	动物细胞	163-26061	1 mL
	动物细胞	169-26063	1 mL×5
蛋白酶抑制剂混合物试剂盒V （无EDTA）（×100） Protease Inhibitor Cocktail Set V (EDTA free) (×100), Lyophilized	2D电泳	162-26031	1 mL
	2D电泳	168-26033	1 mL×5
蛋白酶抑制剂混合物试剂盒 VI，DMSO溶液，用于植物（×100） Protease Inhibitor Cocktail Set VI, DMSO Solution (for Plant) (×100)	植物细胞	164-26091	1 mL
	植物细胞	160-26093	1 mL×5
蛋白酶抑制剂混合物试剂盒VII，DMSO溶液，组氨酸标签蛋白（×100） Protease Inhibitor Cocktail Set VII, DMSO Solution (for Histidine-tagged Protein) (×100)	His Tag 纯化^※	167-26101	1 mL
	His Tag 纯化^※	163-26103	1 mL×5

亲和标签比较表

亲和标签	TARGET	PA	6xHis
氨基酸序列	(YPGQ)5V	GVAMPGAEDDVV	HHHHHH
残基数	21	12	6
分子量 (kDa)	2.34	1.16	0.84
等电点（pI）	5.52	3.49	7.21
配体	TARGET tag	PA tag	Ni, Co, Zn, Cu
亲和珠回收	40% Propyleneglycol, 1×TBS(pH7.5)	3M MgCl₂, MES(pH6.0)	0.5M Imididazole(pH7.4)
单抗边界强度（KD（M））	1.0×10-8	4.9×10-10	Ni-NTA: 1.0×10-5～-6
单抗 Clone No.	P20.1(Mouse)	NZ-1(Rat)	Merck:HIS. H8(Mouse)
亲和力	++++	+++++	+++
提纯成本	+	+	+
多肽洗脱	+++	+++	Imidazole
背景（培养上清）	+	+	+++++
背景（细胞裂解物）	+	+	++++

亲和标签	DYKDDDDK	c-Myc	HA	GST
氨基酸序列	DYKDDDDK	EQKLISEEDL	YPYDVPDYA	–
残基数	8	10	9	218
分子量 (kDa)	1.01	1.20	1.10	26
等电点（pI）	3.97	4.00	3.56	–
配体	DYKDDDDK tag	c-Myc tag	HA tag	GST
亲和珠回收	Tris-HCl, Glycine Buffer(pH2～3.5)	Tris-HCl, Glycine Buffer(pH2～3.5)	Tris-HCl, Glycine Buffer(pH2～3.5)	Glutathione, Tris-HCl, Glycine Buffer(pH2～3.5)
单抗边界强度（KD（M））	2.8×10-8	2.2×10-9	2.8×10-9	Glutathione: 1.0×10-5～-6
单抗 Clone No.	M2(Mouse)	9E10(Mouse)	3F10(Mouse) HA-7(Rat)	Wako:5A7(Mouse)
亲和力	++++	++++	++++	++++
提纯成本	++	++	++	+
多肽洗脱	+++	++	++	Glutathione
背景（培养上清）	++++	+++	+++	++++
背景（细胞裂解物）	++++	++++	+++	++++

　　本比较表为Wako独家调查的数据。样品、检测方法和手法的不同，特异性也会有所变化，因此无法保证各个亲和标签的功能。