ERseeing <Endoplasmic Reticulum Green>-价格-厂家-供应商-wko富士胶片和光

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    ERseeing <Endoplasmic Reticulum Green>ERseeing <Endoplasmic Reticulum Green>-价格-厂家-供应商-wko富士胶片和光

    对活细胞影响少,最适于长时间成像的ER染色试剂

     

     

    本产品是活细胞成像用的不可逆ER染色试剂。与传统的荧光标记Glibenclamide系ER染色试剂相比,对细胞功能的药理作用小,由于其不可逆性,更换培养基后也可进行观察。

     

    ※ 本产品是funakoshi基于京都大学工学研究科浜地格教授·田村朋则讲师的研究成果商品化的产品。

    ※ 本产品仅供研究使用。

     

    ◆现有ER染色试剂的问题点以及ERseeing的优势

    过去通用的ER染色试剂是将荧光染料附着于在ER中特异表达的K通道拮抗剂Glibenclamide上,并广泛用于ER的可视化。然而,由于以下的问题,应用范围有限。

    ●  由于Glibenclamide的药理效果,通道活性被抑制,对细胞的影响大。

    ●  由于是可逆的拮抗剂,因此通过培养基交换等的清洗操作非常容易去除。

    与之相对的,ERseeing是一种新型ER染色试剂,具有与Rhodol绿色荧光染料相连的蛋白标记基团,对ER膜成分具有很高的亲和力。通过选择性地集中在ER上并用荧光基团标记ER蛋白,可以进行不可逆的染色。由于是不可逆的染色,染色后可更换含有FBS的培养基,因此可应用于任何的培养基和试剂处理环境下的长期成像。

     

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    传统产品
    (荧光标记Glibenclamide)

    本产品
    (ERseeing)

    原理

     在ER中发现的ATP敏感性钾离子通道中的特异性配Glibenclamide用荧光标记后,在与受体结合时实现可视化。

     将蛋白标记基团添加到Rhodol绿色荧光染料中,其对ER膜成分具有很高的亲和力。通过对ER上的蛋白质进行荧光标记实现可视化。

    对细胞的影响

     由于Glibenclamide的药理效果会抑制钾离子通道,影响细胞功能。此外,由于依赖钾离子通道表达量,有些细胞可能无法染色。

     不显示药理效果,对细胞功能几乎没有影响。

    不清洗观察活细胞

    良好

    良好

    清洗后观察活细胞

    灵敏度低

    良好

    染色后固定

    可以,但是存在部分染色灵敏度低的可能性

    良好

     

    ◆原著论文

    Fujisawa et al., J. Am. Chem. Soc.140, 17060~17070 (2018). Chemical Profiling of the Endoplasmic Reticulum Proteome Using Designer Labeling Reagents.

     

    ◆特点

    ●  激发/荧光波长:509 nm/524 nm

        ※  可利用一般的绿色色素FTIC的观察条件

    ●  与传统的荧光标记Glibenclamide系染色试剂相比,可以很好地抑制对细胞的影响。

    ●  即使培养基中含有ERseeing也可以进行观察。

        ※  如果在培养基中长时间染色的话,或许会出现色素呈油滴状聚集等非特异性染色的情况。若想提高特异性,建议清洗后再观察。

    ●  由于是不可逆性染色,染色后可更换培养基。染色后可在含有FBS培养基等的任意培养基中成像。

    ●  活细胞染色后,也可固定后观察。还可以与免疫染色法组合使用。

        ※  本试剂不适用于固定后细胞的染色。染色请使用活细胞。

     

    ◆应用实例

    ■  ERM的激发·荧光光谱

    ERseeing <Endoplasmic Reticulum Green>-价格-厂家-供应商-wko富士胶片和光

    激发光谱(蓝)和荧光光谱(绿)

    ※  适用于一般绿色荧光色素FTIC观察条件

     

    ■  验证ER特异性

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    通过与各种细胞器标记共染色评价本试剂的ER特异性。观察到ERseeing(100 nM)与现有的Glibenclamide系ER染色试剂高度共定位(Pearson相关系数>0.9)。另一方面,未观察到与溶酶体标记和线粒体标记的共定位。高尔基体标记观察到部分共定位,可能是本试剂标记的蛋白通过高尔基体转运,从ER转移至分泌途径。然而,添加ER-Golgi转运抑制剂的话会减少与高尔基体的共定位。(详情请参考原著论文)

     

    ■  评价细胞内滞留性

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    向无血清培养基培养的HeLa细胞内添加ERseeing以及传统的荧光标记Glibenclamide,染色15 min后进行观察(左)。然后,更换含有10%FBS的培养基再次观察。荧光标记Glibenclamide在清洗后荧光信号明显消失了,但是由于ERseeing是不可逆染色的,清洗后也能观察到很强的荧光信号。使用ERseeing进行ER染色后,可以在含FBS的培养基中培养并进行各种成像。

    ◆产品列表

    产品编号 产品名称 包装
    FDV-0038 ERseeing <Endoplasmic Reticulum Green> 10 nmol
    温馨提示:不可用于临床治疗。

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