测序级重组赖氨酰内肽酶/胰蛋白酶预混装

◆概述

本品选用A. Lyticus 来源氨基酸序列，利用独特大肠杆菌重组表达技术制备的Lys-C，能够特异性识别并酶切肽链中Lys 羧基端肽键；其与重组表达并经甲基化修饰的测序级胰蛋白酶，经研究和方法验证，按照特定比例混合后，能够在一次酶切或分步酶切中，保证特异性的前提下，酶切效率更高，便于进行序列分析。

◆优势

1）采用甲基化修饰重组表达胰蛋白酶，其赖氨酸残基经甲基化修饰有效防止酶切缓冲中胰酶自切或被Lys-C 降解造成胰酶活性的降低。

2）独有的Lys-C 重组表达制备技术，保证高纯度与高酶活性的同时，无任何杂酶活性，确保酶切反应的特异性。

◆纯度·来源

选用A. Lyticus 来源氨基酸序列，利用独特大肠杆菌重组表达技术制备的Lys-C

选用猪的胰腺来源阳离子型胰蛋白酶基因，利用毕赤酵母菌株重组表达技术制备的胰蛋白酶

◆使用方法

溶解缓冲：用无菌水或者50mmol/L Tris-HCl，pH 8.0~8.5；溶解后分装，-15℃以下保存。

酶切缓冲：50mmol/L Tris-HCl，pH 8.0~8.5

推荐条件：蛋白酶:融合蛋白质量比1:25~1:100（蛋白组学或肽图）37℃反应。

针对疏水性强、溶解性较差的蛋白，可添加变性剂或者封闭二硫键（烷基化）使其空间结构被打开，从而提高酶切效率或者提高肽图覆盖率。

可以参考以下方法：

两步溶出法消化：可以添加终浓度为5mmol/L的DTT 在室温反应30min ； 再加入终浓度为10mmol/L 的碘乙·酰胺，在室温避光反应30min。蛋白溶液中补入终浓度6~8mol/L 尿素，胰蛋白酶/Lys-C 与蛋白质或蛋白质混合物以1：25 的蛋白质∶蛋白酶比(w/w)混合并在37℃下孵育3~4h，用酶切缓冲稀释尿酸降至1mol/L 以下，在37℃反应过夜。

终止反应：加入终浓度0.5-1%三氟乙·酸，14000-16000×g，离心10min 去除沉淀颗粒。

◆保存条件

储存稳定性：冻干粉存于-15℃以下，24 个月稳定；50mmol/L Tris-HCl pH 8.0~8.5 溶解后储存于-15℃以下，反复冻融5 次，无活性损失。

运输稳定性：冰袋保温运输，活性稳定。

◆应用实例

Lys-C/Trypsin Mix 与Trypsin 特异性酶切抗体对比图

蛋白酶：单抗质量比1:25，37℃酶切反应过夜。

(更多范畴应用实例，请与我们联系)

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