Pfu DNA聚合酶使用方法

产品描述：Pfu DNA聚合酶是pyrococcus furiosis 菌中的热稳定性聚合酶，在70～80℃时，镁离子存在的情况下可催化核苷酸沿着5’→3’的方向发生聚合反应，催化DNA的合成。该酶分子量约为90KD。与Taq DNA聚合酶不同，Pfu DNA聚合酶具有3’ →5’外切酶活性，即具有校正功能。建议需要高度保真性的PCR扩增反应和引物延伸中使用Pfu DNA聚合酶。使用Pfu DNA聚合酶的PCR产物是平末端。

来源：表达Pfu DNA聚合酶的大肠杆菌。

酶储存缓冲液：50mMTris-HCl，pH 8.2；0.1mM EDTA；1mM DTT；0.1% Nonidet P40；0.1% Tween 20；50% 甘油。

单位定义：在74℃条件下，30分钟内催化10 nmmoldNTP的掺入反应成为酸不溶性物质所需要的酶量为一个单位。

Pfu DNA聚合酶的用途：

1）常规PCR反应中的DNA高保真体外扩增；

2）基因定点突变和拼接。

Pfu DNA聚合酶的注意事项：

1、酶浓度：建议在50ml的体系中使用1.25个单位的Pfu DNA聚合酶，因为酶存在3’-5’外切酶活性，高浓度的酶可能会增加降解引物的可能性。最好在加完dNTP后再添加Pfu DNA聚合酶。并在有冰浴的条件下混合PCR反应中的各种成分。

2、延伸时间：Pfu DNA聚合酶的延伸速率低于Taq DNA聚合酶，大约为一分钟600个碱基（Taq DNA聚合酶大约为一分钟2000个碱基），因此建议扩增1Kb的DNA用两分钟的延伸时间。对于大多数的反应而言，25～35个扩增循环就足够了。

保存：-20℃保存至少一年。