微生物培养基的灭菌方法有哪些

      微生物培养基是供微生物生长和维持用的人工配制的养料，不同培养基可根据实际需要，添加一些自身无法合成的化合物，即生长因子。按照培养基的成分来分 培养基按其所含成分，可分为合成培养基、天然培养基和版合成培养基三类。按照微生物的种类分 培养基按微生物的种类可分为细菌培养基、放线菌培养基、酵母菌培养基和霉菌培养基等四类。培养基应具有适宜的pH值、一定的缓冲能力、一定的氧化还原电位及合适的渗透压。为了达到特定要求的研究，需要进行培养基配制和灭菌。那么微生物培养基的灭菌方法有哪些呢？

      微生物培养基的灭菌方法

      灭菌的方法，通常可以分为加热灭菌（包括直接灼烧灭菌、干热灭菌、加压蒸汽灭菌、间歇灭菌和煮沸消毒）、过滤去菌、射线灭菌和消毒、化学药剂灭菌和消毒四大类。下面具体讲解微生物培养基的灭菌方法。

      1. 干热灭菌法（即热空气灭菌法）

      干热灭菌一般是利用电热烘箱作为干热灭菌器。前面所包装好的玻璃器皿，如带棉塞的三角瓶，试管、包装好的吸管、培养皿等，放入电热烘箱中。

      打开烘箱顶部的通气孔，接上电源加热，使箱内空气的温度达到160℃~170℃，关闭通气孔使箱内的温度保持在160℃左右并维持1.5-2h。时间一到，切断电源。待温度下降60℃~70℃以下，方可打开箱门取灭菌物品，否则骤冷后易使箱内玻璃仪器破损。

      2. 加压蒸气灭菌法

      利用高压灭菌器，使水的沸点在密闭的灭菌器内随压力升高而增高，来提高蒸汽的温度和灭菌的效率。

      在同一温度下湿热的杀菌效率比干热大，因为微生物细胞蛋白质在湿热情况下，易干凝固。同时湿热的穿透力强，当水蒸汽与被灭菌的物品相接触后，便放出汽化潜热，逐步提高被灭菌物品的温度，直至与水蒸汽的温度相等，达到平衡为止，从而提高灭菌效率。

      手提式高压灭菌锅灭菌的操作步骤如下：

      （1）在灭菌器内加入一定量的水（有的灭菌器内加水至止水线）。将用防水纸包扎好的灭菌物品如培养基、无菌水等，放进灭菌器内。

      （2）接通电源，进行加热。

      （3）当压力到达5bl/in2时，打开放气阀，使锅内的空气和水蒸汽一同排出，直至压力表的压力恢复到零，然后关闭排气阀，继续加热。

      （4）当压力表＊的压力到达15bl/in2（即 1.05kg/cm2）时，此时灭菌器内的温度达到121℃，维持30min不变。对热不稳定的培养基灭菌时，应适当降低压力，延长时间。

      （5）灭菌时间一到，切断电源，待压力下降至零时，才能打开排气孔，然后打开灭菌器盖，取出物品。如果灭菌后的固体培养基要做成斜面，需趁热放置。还需检查培养基灭菌是否彻底。

      3. 间歇灭菌法

      常采用阿诺（Arnold）氏灭菌器和柯赫（Koch）氏灭菌器或蒸笼灭菌，常压条件下蒸汽温度不超过100℃。在没有高压灭菌器设备的情况下或不宜加压灭菌的物品，可采用此法灭菌。

方法是：待灭菌物品放在灭菌器或蒸笼里，每d蒸煮1次，每次煮沸lh，连续3d重复进行。在每两次蒸煮之间，将物品（指培养基）放在37C恒温条件下培养过夜，这样可以使每次蒸煮后未杀死的残留芽孢萌发成营养体，以便下1次蒸煮时杀灭。

      4. 过滤除菌法

      一些不能加热灭菌的液体物质（如维生素、血清），可以用过滤除菌法，一般用细菌过滤器进行除菌。

      细菌过滤器中的过滤板常用陶瓷、硅藻土或石棉等做成，过滤板孔眼很小，细菌不能通过。因此，过滤后的液体就除去了细菌。在进行过滤除菌前，整个细菌过滤器和接受液体的器皿，必须要包装妥当并进行加压蒸汽灭菌后方可使用。

      下面介绍石棉板滤器的构造及其操作方法。石棉板滤器又称蔡氏（Scitz）滤器，它是由石棉制成的圆形滤板和一个特制漏斗组成。此漏斗分上下两节。上节为圆形金属筒，下节为金属漏斗。两节由三个活动螺旋固定，便于装卸。使用时拆开两节，将滤板放在漏斗上的金属筛板，再加上上节，然后将螺旋扭紧，将欲滤溶液置于滤器中抽滤。每次过滤必须用一张无菌的新滤板。石棉板滤器因容积大小不同而有各种型号，石棉板也有不同规格型号使用时必须根据需要搭配妥当。

      5. 紫外线灭菌

      波长260~280nm之间的紫外线有很强的杀菌能力，一般紫外灯管能产生253.7nm的紫外光，杀死力强而稳定，但穿透力弱一般只适宜物体表面、空气灭菌。例如接种室、培养室、手术室、药厂包装室等空气灭菌。一般30w灯管、9m3空间，距地面2m每次打开紫外线照射0.5h，就使室内空气灭菌。若照射紫外线时，先喷洒石碳酸等化学消毒剂，可增强灭菌效果。

      在进行微生物接种和分离等操作时，常须用紫外线来杀灭接种室（箱）空气、台面等处的微生物。

      紫外线虽有较强的杀菌力，但穿透力较弱，即使一薄层玻璃或水层就能将大部分紫外线滤除，因此只适用于空气及表面杀菌。

      紫外线对眼粘膜及视神经有强烈的损伤作用，对皮肤有刺激作用，所以不能直接在紫外线灯开启下工作和用眼睛直视开启的紫外灯。

      6. 化学药剂消毒灭菌

      微生物实验室中常用的化学杀菌剂有升汞、甲醛、高锰酸钾、酒精、碘酒、龙胆紫、石炭酸、漂白粉、新洁尔灭、煤酚皂溶液，它们有的是杀菌剂，有的是抑菌剂，

      以上就是微生物培养基的灭菌方法说明，如果你的培养基中所有的成分都可以耐高温，那就用压力蒸汽高温灭菌的方式。如果你的培养基中有些成分不耐高温，就可以用除菌过滤的方式除菌：用除菌滤器过滤培养基至已灭菌的培养器中。如何要求不高，部分试验用培养基，可以用煮沸的方式灭菌。