sybr green做miRNA实验原理及思路

SYBR Green I是高灵敏的DNA荧光染料，适用于各种电泳分析，操作简单：无须脱色或冲洗。至少可检出20pg DNA，高于EB染色法25-100倍。SYBR Green I 与dsDNA 结合荧光信号会增强800-1000倍，用SYBR Green I染色的凝胶样品荧光信号强，背景信号低。可适用于多种电泳分析。

用QPCR来做miRNA的扩增其实是一件比较难的事，因为miRNA是只有18-23个碱基的单链RNA，普通的PCR扩增方法是无法直接用的，所以目前有两种主流的解决思路：

方法1、设计颈环引物，反转录得到cDNA，然后结合探针的方法在PCR扩增时进行荧光定量，这种方法以ABI公司为代表，优点是扩增特异性好，缺点是成本太高，所以ABI的miRNA技术服务是很贵的 

方法2、通过在miRNA 3‘端进行加A，以延长片段的长度，然后通过特殊设计的RT引物反转录得到cDNA，最后用SYBR为荧光染料进行定量PCR，此法优点是价格便宜，操作简单，灵敏度高，尤其对低丰度miRNA的检测要明显优于探针法；缺点是特异性稍差，不过最近研究发现miRNA 的3’端有多样性。

总的来说方法2要好于方法1 ，因为一旦miRNA 3‘端增加或减少一两个碱基，颈环引物则无法使用，也就是说方法1只能检测某种miRNA的一种序列。

上海金畔生物科技有限公司产SYBR Green i 产品特点：

高灵敏：至少可检出20pg DNA，高于EB染色法25-100倍。

信噪比高：样品荧光信号强，背景信号低。

操作简单：无须脱色或冲洗。

适用范围广：可适用于多种电泳分析。

使用方便：不影响其它修饰酶作用。

经济：价格比银染便宜。