蛋白酶k作用位点
蛋白酶K，是一种切割活性较广的丝氨酸蛋白酶。蛋白酶K的应用比较广泛。包括制备脉冲电泳的染色体 DNA，蛋白质印迹以及去除DNA和RNA制备中的核酸酶。蛋白酶K的一般工作浓度是50—100μg/ml。在较广的pH范围内(pH 4-12.5)均有活性。蛋白酶K的应用比较广泛，它可以消化包围靶DNA蛋白，因此使用蛋白酶K能够增加探针 与靶核酸结合的机会增强杂交信号，但在使用蛋白酶K时要主要使用的浓度，过高或者过低都会破坏细胞的结构、核消失等影响试验结果。
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蛋白酶 |
分类 |
作用位点 |
已知抑制物 |
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氨基肽酶 |
金属蛋白酶 |
带有自由氨基的L-氨基酸氨基末端；不能分解由X-Pro、·D或·Q组成的肽键 |
2，2，双吡啶，1．1（）-菲咯啉 |
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菠萝蛋白酶 |
巯基蛋白酶 |
无特异性 |
α2巨球蛋白，TPCK，TLCK，烷化 |
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羧肽酶A |
锌金属蛋白酶 |
带有自由氨基酸的L—氨基酸羧基端；不能分解R、P或羟脯氨酸 |
EDTA，EGTA |
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羧肽酶B |
锌金属蛋白酶 |
K，R羧基端 |
EDTA，EGTA，碱性氨基酸 |
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羧肽酶Y |
丝氨酸羧肽酶 |
氨基酸羧基端 |
PMSF |
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组织蛋白酶C |
琉基蛋白酶 |
氨基端双肽，可通过K，R或P氨基端作为第二或第三个氨基酸封闭 |
醋酸碘， 甲醛 |
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胰凝乳蛋白酶 |
丝氨酸蛋白酶 |
在F，T或Y之后 |
抑肽酶，PMSF，TPCK，α—巨球蛋白 |
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胶原酶 |
金属蛋白酶 |
在P-X-G-P肽链中X之后 |
EDTA，EGTA，还原剂，但无血清存在 |
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dispase |
金属蛋白酶 |
无特异性 |
EDTA，EGTA，Hg2+，重金属 |
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内肽酶Arg-C |
丝氨酸蛋白酶 |
在R之后 |
α巨球蛋白，TLCK |
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内肽酶Asp-N |
金属蛋白酶 |
在D和半胱氨酸之前 |
EDTA，α菲咯啉 |
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内肽酶Glu-C |
丝氨酸蛋白酶 |
在E或D之后 |
α巨球蛋白，TLCK |
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内肽酶Lys-C |
丝氨酸蛋白酶 |
在K之后 |
TLCK，抑肽酶，抑蛋白酶醛肽 |
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肠激酶 |
丝氨酸蛋白酶 |
在D-D-D-D-K-肽链中K之后 |
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Xa因子 |
丝氨酸蛋白酶 |
在R之后 |
PMSF，APMSF，大豆胰蛋白酶抑制物 |
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无花果蛋白酶 |
琉基蛋白酶 |
无特异性 |
TPCK，TLCK，α-巨球蛋白 |
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激肽释放酶 |
丝氨酸蛋白酶 |
在一些R之后 |
抑肽酶，抑蛋白酶醛肽 |
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木瓜蛋白酶 |
巯基蛋白酶 |
长期孵育时具有广泛特异性 |
TPCK，TLCK，抑蛋白酶醛肽α—巨球蛋白，烷化剂 |
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胃蛋白酶 |
酸蛋白酶 |
广泛特异性 |
胃蛋白酶抑制素 |
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纤溶酶 |
丝氨酸蛋白酶 |
在K或R之后 |
PMSF，TLCK，抑肽酶，α—巨球蛋白 |
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链霉蛋白酶 |
混合型 |
无特异性 |
B．M．完整药片 |
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蛋白酶K |
丝氨酸蛋白酶 |
广泛特异性 |
PMSF，PefablocSc |
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枯草杆菌蛋白酶 |
丝氨酸蛋白酶 |
无特异性 |
PMSF，α巨球蛋白，苯甲脒 |
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热溶素 |
锌金属蛋白酶 |
在非极性残基之前 |
EDTA |
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凝血酶 |
丝氨酸蛋白酶 |
在K之后 |
TLCK，PMSF，抑蛋白酶醛肽 抑肽酶，α巨球蛋白，苯甲脒 |
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胰蛋白酶 |
丝氨酸蛋白酶 |
在K或R之后 |
TLCK，PMSF，抑蛋白酶醛肽 抑肽酶，α巨球蛋白 |
