SuperSep Phos-tag 丙烯酰胺预制胶

包装：5块

英文名：SuperSep Phos-tag
别名：丙烯酰胺预制胶
品牌：Wako

SuperSep Phos-tag?丙烯酰胺预制胶,内含50uMPhos-tag丙烯酰胺,可用于磷酸化蛋白的分离。预制胶中含有锌作为金属离子，无需特异性磷酸化抗体或者同位素标记，在中性凝胶缓冲液中保存稳定性很好，结果条带清晰。预制胶打开包装即可直接使用。根据实验条件,Phos-tag预制胶有多款丙烯酰胺浓度和孔数可选,提供专门适合BioRad和Life Technologies电泳槽尺寸的预制胶。

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SuperSep Phos-tag^™丙烯酰胺预制胶

SuperSep Phos-tag^™丙烯酰胺预制胶,内含50uMPhos-tag丙烯酰胺,可用于磷酸化蛋白的分离。预制胶中含有锌作为金属离子，无需特异性磷酸化抗体或者同位素标记，在中性凝胶缓冲液中保存稳定性很好，结果条带清晰。预制胶打开包装即可直接使用。根据实验条件,Phos-tag预制胶有多款丙烯酰胺浓度和孔数可选,提供专门适合BioRad和Life Technologies电泳槽尺寸的预制胶。

Phos-tag^™磷酸化亲和电泳原理

SuperSep Phos-tag丙烯酰胺预制胶产品特点：

■ 即开即用 – 节约最宝贵的时间
■ 根据磷酸化程度分离磷酸化蛋白
■ 分离效果好，条带清晰
■ 无需磷酸化特异性抗体和放射性同位素标记

SuperSep Phos-tag丙烯酰胺预制胶案例：

(1）分离磷酸化和去磷酸蛋白

[电泳缓冲液]
Tris-甘氨酸-SDS 缓冲液

[电泳样品]
条带1: 未处理白蛋白
条带2: 去磷酸化白蛋白

[电泳条件] 20 mA, 70分钟
[染色] CBB快速染色
[脱色] 去离子水

白蛋白(Wako# 010-17071)的去磷酸化，采用的是碱性磷酸酶(日本基因公司,货号319-02661)。条带迁移证明去磷酸化完成。

(2）去磷酸化过程

[电泳缓冲液]
Tris-甘氨酸-SDS 缓冲液

[电泳样品]
条带1: β-酪蛋白 (碱性磷酸酶处理, 0 分钟)
条带2: β-酪蛋白 (碱性磷酸酶处理, 15 分钟)
条带3: β-酪蛋白 (碱性磷酸酶处理, 30 分钟)
条带4: β-酪蛋白 (碱性磷酸酶处理, 45 分钟)
条带5: β-酪蛋白 (碱性磷酸酶处理, 60 分钟)

[电泳条件] 35 mA, 60分钟
[染色] CBB快速染色
[脱色] 去离子水

β-酪蛋白按时间序列进行去磷酸化。结果证明磷酸化和去磷酸化β-酪蛋白分离开了。同时验证去磷酸化程度与时间相关。

SuperSep Phos-tag丙烯酰胺预制胶产品列表

1、适用于Bio-Rad电泳槽的预制胶

Product Name	Wako Cat. No.	Pkg. Size
SuperSep Phos-tag™ (50 μmol/L), 7.5%, 17 wells 83 x 100 x 3.9 mm	198-17981	5 gels
SuperSep Phos-tag™ (50 μmol/L), 12.5%, 17 wells 83 x 100 x 3.9 mm	195-17991	5 gels

2、适用于Life-technology电泳槽的预制胶

Product Name	Wako Cat. No.	Pkg. Size
SuperSep Phos-tag™ (50 μmol/L), 7.5%, 17 wells 100 x 100 x 6.6 mm	192-18001	5 gels
SuperSep Phos-tag™ (50 μmol/L), 12.5%, 17 wells 100 x 100 x 6.6 mm	199-18011	5 gels

3、适用于wako电泳槽的预制胶（>90 x 85 x 1 mm）

Product Name	Well	Wako Cat. No.	Pkg. Size
SuperSep Phos-tag™ (50 μmol/L), 6%	13 wells	192-17401	5 gels
SuperSep Phos-tag™ (50 μmol/L), 6%	17 wells	199-17391	5 gels
SuperSep Phos-tag™ (50 μmol/L), 7.5%	13 wells	195-17371	5 gels
SuperSep Phos-tag™ (50 μmol/L), 7.5%	17 wells	192-17381	5 gels
SuperSep Phos-tag™ (50 μmol/L), 10%	13 wells	193-16711	5 gels
SuperSep Phos-tag™ (50 μmol/L), 10%	17 wells	190-16721	5 gels
SuperSep Phos-tag™ (50 μmol/L), 12.5%	13 wells	195-16391	5 gels
SuperSep Phos-tag™ (50 μmol/L), 12.5%	17 wells	193-16571	5 gels
SuperSep Phos-tag™ (50 μmol/L), 15%	13 wells	193-16691	5 gels
SuperSep Phos-tag™ (50 μmol/L), 15%	17 wells	196-16701	5 gels
SuperSep Phos-tag™ (50 μmol/L), 17.5%	13 wells	197-16851	5 gels
SuperSep Phos-tag™ (50 μmol/L), 17.5%	17 wells	194-16861	5 gels

SuperSep Phos-tag丙烯酰胺预制胶使用须知

样品制备：
Phos-tag SDS-PAGE对于蛋白样品中的杂质非常敏感，尤其是螯合剂，钒酸，无机盐，表面活性剂这类物质。
强烈建议在Phos-tag SDS-PAGE之前通过TCA沉淀或渗析法降低杂质含量。

转膜前处理：
另一个必须的步骤是在转膜前，用EDTA去除凝胶中的金属离子（Mn2+或者Zn2+）；该步骤可提高蛋白的转膜效率。

分别准备10 mmol/L 含EDTA和不含EDTA 两种1x transfer buffer。
将凝胶浸泡在含10 mmol/L EDTA的1x transfer buffer，至少20分钟，温和摇晃。更换新缓冲液，重复3次。
将凝胶浸泡在不含10 mmol/L EDTA的1x transfer buffer，10分钟，温和摇晃。
转膜操作*。

* 建议用湿法转膜，以提高转膜效率。