耗材、标准品与样本对内毒素检测结果的影响

◆耗材

　　进行内毒素检测时必须使用不含内毒素和β-葡聚糖的耗材。需要进行30分钟以上超过250℃的干热来灭活内毒素，所以通常会使用干热灭菌的玻璃器具。洗脱出的微量金属离子（Fe、Al、Ga、Cr等）会影响内毒素检测，因此需要避免使用金属器具。如果生产商无法保证一次性塑料耗材适用于内毒素检测，就需要对比玻璃器具，确认一次性塑料耗材①不受内毒素污染；②不吸附内毒素；③不含影响检测结果的洗脱物。

 

◆标准品

根据实验目的选择合适的内毒素标准品。

●  依据日本药典进行药物最终产品检验等检测。

※必须使用药典规定的内毒素标准品。

●  进行原料或工艺检查。

对在美国销售的药剂（FDA规定）实施最终检验。

※可使用Control Standard Endotoxin（CSE）。

 

◆样品的影响

进行内毒素检测时必须注意样品对检测的影响（反应干扰因子）。

①    影响鲎试剂的物质

●   蛋白变性剂（酸、碱、尿素、表面活性剂、有机溶剂）

●   蛋白酶、蛋白酶抑制剂

●   螯合剂（捕获反应所需的Ca和Mg）

●   比色法中的着色剂（405nm附近吸光度较大的物质）

●   比浊法中的浊度

②    影响内毒素的物质

●   金属离子（Fe、Al、Ga、Cr离子等。含量低至μM水平也会对内毒素造成影响）

●   表面活性剂

 

　　样品对检测的影响可以通过药典中的反应干扰因子测试来判断，即检测加标已知量内毒素的样品并求取加标内毒素量的回收率。在比色法和比浊法（光学定量法）中，若加标内毒素的回收率为50~200%，则样品对检测没有影响，换句话说，样品对该浓度下的内毒素检测没有影响。对样品进行稀释及检测可减少样品对内毒素检测结果的影响。

　　然而，稀释样品会提高通过原始溶液换算（预稀释溶液）检测出的内毒素浓度。可稀释率（最大有效稀释率）由需要检测的内毒素浓度以及使用的鲎试剂的检测灵敏度决定（反应干扰因子测试最大有效稀释率的详情请参考日本药典中的内毒素检测法）。

　　在凝胶法中，用于反应干扰因子测试的样品溶液必须使鲎试剂呈阴性判定。即内毒素的量如果超过了鲎试剂检测灵敏度，则检测无法实行。如果难以获得无内毒素污染的样品，原则上建议使用光学定量法来替代凝胶法。另外还可以将鲎试剂更换成灵敏度较低的试剂来进行检测。

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