Phos-tag™ 样品预处理攻略

Phos-tag™ SDS-PAGE容易受样品中EDTA、无机盐、表面活性剂等的影响，造成条带弯曲、变形。因此上样前样品需要进行预处理。

没进行预处理的示例

◆材料准备

– 待处理蛋白样品*

– 1% DOC（脱氧胆酸钠）

– TCA（三氯乙酸），保存在4℃

– 预冷丙酮

*样品中含有的Triton X-100（聚乙二醇辛基苯基醚）、蔗糖等可能会引起沉淀

◆预处理图解

STEP1： 在每200 μL的蛋白样品中加入5 μL 1% DOC

STEP2： 涡旋混匀并在37℃下孵育10分钟

STEP3： 加入200 μL 20% TCA

STEP4： 涡旋混匀并置于冰上5分钟

STEP5： 4℃ 15000 rpm 离心10分钟

STEP6： 去上清

STEP7： 加入500 μL预冷丙酮

STEP8： 简单混匀

●  重复步骤5-8

Step 5：4℃ 15000 rpm离心10分钟

Step 6：去上清（丙酮）

Step 7：加入500μL预冷丙酮

Step 8：简单混匀

Step 9：4℃ 15000 rpm离心10分钟

STEP10：吸出丙酮，小心避开沉淀

STEP11：干燥10分钟

STEP12：加入SDS-PAGE样品缓冲液

STEP13：简单混匀

注意

· 若沉淀不能完全溶于缓冲液，加入1M Tris·Cl以提高pH

STEP14：超声处理

STEP15：100℃ 加热5-10分钟

预处理完整视频请点击此处查看