高性能基因导入试剂
ScreenFect ™ 通信 向HeLa细胞导入siRNA数据

 

下面为大家介绍使用 ScreenFect ™ siRNA向HeLa细胞导入 siRNA 数据的实验成果及逆转染（1-STEP）Protocol。

◆向 HeLa 细胞的逆转染例子（24孔培养板）

细胞的前期培养

1.     用适当的培养容器（T-75 烧瓶），将 HeLa 细胞培养至半融合状态。

配制转染试剂

1.     准备两支 1.5 mL 灭菌试管。

2.     在其中一支试管里加入 24.5 μL ScreenFect ™ Dilution buffer。

3.     再往步骤2的试管里加入 0.5 μL 的 ScreenFect ™ siRNA reagent，使全部容量达到 25 μL。…溶液（A）（ScreenFect ™ siRNA reagent

        在使用前进行涡旋处理。）

4.     在另一支试管里加入 24 μL ScreenFect ™ Dilution buffer。

5.     再向步骤4的试管里加入 1 μL 的 5 μmol/L PIK3CB siRNA 溶液（5 pmol）…溶液（B）

6.     将溶液（B）全部添加至溶液（A）的试管中。

7.     轻敲试管，使溶液混合均匀。再用台式离心机降速处理。

8.     在室温下孵浴 5~20 分钟。

配制配制细胞悬浮液

1.     从恒温箱里取出【细胞的前期培养】的烧瓶。

2.     去除培养基，用 PBS 清洗一次。

3.     向烧瓶里添加 2 mL 胰蛋白酶溶液后，放入室温、5% CO₂ 的恒温箱里培养，直到细胞从培养容器中脱落。

4.     加入约 5 mL FBS 添加培养基使反应停止。

5.     利用移液器使细胞分散，将全部培养液转移到离心管中。

6.     150×g 离心，5 分钟。

7.     去除上清时不要去掉颗粒物。

8.     添加 5~10 mL 新的培养基，利用移液器使细胞分散。

9.     用血细胞计数板等的细胞计算器检测细胞数。

10.  检测出细胞悬浮液的浓度后经过计算，以此配制 2.0×10⁵ cells/mL 的细胞悬浮液。（配制的细胞悬浮液量可根据实验规模进行适当地调节。）

转染

1.     将 500 μL 在【配制细胞悬浮液】时配制好的细胞悬浮液添加至细胞培养板里。

2.     将 50 μL 在【配制转染试剂】步骤８中孵浴的 DNA-lipid complex 添加至细胞培养板里，轻摇培养板使溶液混合（也可以先往细胞培养板

        里加入 50 μL DNA-lipid complex，再加入 500 μL 细胞悬浮液）。

3.     放入 CO₂ 的恒温箱里培养 24~48 小时后即可进行后续实验。

 

 

◆实验数据

　　用逆向转染法和正向转染法向 HeLa 细胞进行 PIK3CB siRNA 的导入实验，通过实时定量 PCR 检测出 PIK3CB mRNA 的表达量。将定量结果得出的敲减效率，与原来用其他公司的产品进行实验得出的敲减效率进行比较，结果显示，ScreenFect ™ siRNA 拥有高于其他公司产品抑制目的基因表达的效率。

【逆向转染（1-STEP）】

【正向转染（2-STEP）】

◆产品列表

产品编号	产品名称	规格	包装
299-75001	ScreenFect ™ siRNA转染试剂 ScreenFect ™ siRNA	基因研究用	0.2 mL
295-75003			1 mL
293-75004			1 mL×5