使用细胞融合试剂 GenomONE™-CF 制备抗体的方法

GenomONE ™ – CF 对细胞温和，比起PEG法，操作更简单。

本文介绍使用仅经抗原（小分子化合物）免疫1次的小鼠脾细胞在短时间内获得可产生抗体杂交瘤的实验示例。

抗原⇒CML（Nε-(carboxymethyl) lysine）和BSA（bovine serum albumin）的复合物。

 

将0.1 mg抗原（CML-BSA复合物）与弗氏完全佐剂同时皮内注射至小鼠尾根部位，2周后（没有最终免疫），切除小鼠脾脏。

 

使用GenomONE ™ – CF 对解离得到的脾脏细胞（6×10⁷）和小鼠骨髓瘤（X-63-Ag8.653，1.2×10⁷）进行融合。

 

融合后，用30 mL培养基（10%FBS/RPM1640）悬浮，取其中的15 mL加入市售的补充剂（HLCM：CSTi # 0232，final 0.5-2%），在3个96孔板上进行培养。第二天将一半培养基换成HAT培养基。之后每次更换培养基同样都加入HLCM。10天后，（ELISA）评估细胞集落的增殖和上清中的抗体效价。

杂交瘤阳性孔数（阳性率%）	CML抗体产生阳性孔数（阳性率%）
285/288（99%）	9/288（3.1%）

克隆1次后，从具有各种特异性模式的杂交瘤中建立CML特异性抗体产生菌株43-2C（与CEL结合性的比较）

43-2C抗体（IgG1, κ）的特异性
	CML：Nε-(carboxymethyl) lysine 美拉德反应产物 (AGE) 的主要结构之一。4次免疫后使用PEG进行融合的常规方法难以获得抗体。 CEL：Nε-(carboxyethyl) lysine 与CML类似的AGE的主要结构。 MSA：mouse serum albumin

上述结果为其中一例，可以根据抗原、骨髓瘤、supplement等的类型来优化实验条件。

◆GenomONE ™ – CF 产品规格

产品编号	Freeze-dried HVJ-E （相当于0.26 mL/支）	HVJ-E Suspending Buffer （0.5 mL/支）	Cell Fusion Buffer （20×浓缩）（10 mL/支）
388-18721	1	1	1
384-18723	4	3	4