T4 DNA 连接酶 货 号 #M0202L-NEB酶试剂 New England Biolabs

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产品资料 – DNA修饰酶与克隆技术 – DNA 连接酶

T4 DNA 连接酶                              收藏

T4 DNA 连接酶                货   号                  #M0202L T4 DNA 连接酶                货   号                  #M0202L T4 DNA 连接酶                货   号                  #M0202L T4 DNA 连接酶                货   号                  #M0202L

货 号
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#M0202L
100,000 units
3,039.00

#M0202M
100,000 units (高浓度 5X)
3,039.00

#M0202S
20,000 units
759.00

#M0202T
20,000 units (高浓度 5X)
759.00

#M0202V
10,000 units
419.00

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特性

 高效连接粘性末端和平末端
 T/A 克隆
 dsDNA 切刻修复
 构建高丰度克隆文库
 RNA 和 DNA 的连接 

概述

该酶催化双链 DNA 或 RNA 上相邻的 5´ -磷酸末端和 3´ -羟基末端形成磷酸二酯键。该酶不仅能够催化平齐末端或粘性末端之间的连接,还可以修复双链 DNA、RNA 或 DNA/RNA 杂交双链中的单链切刻。

来源

纯化自 E. coli C600 pcl857 pPLc28 lig8。

反应条件

1X T4 DNA 连接酶反应缓冲液
[50 mM Tris-HCl(pH 7.5 @ 25℃),10 mM MgCl2,10 mM DTT,1 mM ATP] 推荐 DNA 5´ 末端浓度为 0.1-1.0 μM,16℃ 温育。

热失活

65℃ 加热 10 分钟。

质保声明

T4 DNA 连接酶经过严格的质控检测,确保该产品具有最高的活性和纯度。详情请登陆www.neb.comwww.neb-china.com

单位定义(粘性末端活性单位)

1 单位指在 20 μl 1X T4 DNA 连接酶反应缓冲液中,16℃ 反应条件下,30 分钟能使 50% 的经 HindIII 消化的λDNA 片段 [5´ 端浓度为 0.12 μM(300μg/ml)] 连接所需的酶量。

浓度

400,000 units/ml 和 2,000,000 units/ml。

注意事项

E. coli DNA 连接酶需要 NAD+ 作辅因子不同,T4 DNA 连接酶的辅因子是 ATP。若需稀释 T4 DNA 连接酶,推荐使用 50% 甘油贮存缓冲液(稀释缓冲液 A,NEB #B8001)稀释,-20℃ 保存。如稀释后马上使用,也可用 1X T4 DNA 连接酶反应缓冲液稀释。
只要在反应体系中补加 1 mM ATP,连接反应就可以在 NEB 提供的四种限制性内切酶缓冲液或在 T4 DNA 多聚核苷酸激酶反应缓冲液中进行。

参考文献

该产品的特性和应用的参考文献,请登陆 www.neb.comwww.neb-china.com

 

 

 

 

T4 DNA 连接酶                货   号                  #M0202L

T4 DNA 连接酶                货   号                  #M0202L

T4 DNA 连接酶                货   号                  #M0202L

E. coli DNA 连接酶 货 号 #M0205L-NEB酶试剂 New England Biolabs

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E. coli DNA 连接酶                              收藏

E. coli DNA 连接酶                货   号                  #M0205L E. coli DNA 连接酶                货   号                  #M0205L E. coli DNA 连接酶                货   号                  #M0205L E. coli DNA 连接酶                货   号                  #M0205L

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#M0205L
1,000 units
2,859.00

#M0205S
200 units
719.00

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特性

 dsDNA 切刻修复
 Okayama 和 Berg cDNA 克隆 

概述

催化双链 DNA 粘性末端的 5´ -磷酸和 3´ –羟基形成磷酸二酯键。不能有效连接平末端底物。E. coli DNA 连接酶以 NAD 为辅因子。在 4-37℃范围内,E. coli DNA 连接酶均有活性。

来源

纯化自重组 E. coli 菌株,该菌株携带 E. coli DNA 连接酶的编码基因。 

反应条件

1X E. coli DNA 连接酶缓冲液
[30 mM Tris-HCl(pH 8.0 @ 25℃),4 mM MgCl2,1 mM DTT,26 μM NAD+,50 μg/ml BSA],最适反应温度为16℃。 

热失活

65℃ 加热 20 分钟。 

质保声明

E. coli DNA 连接酶经过严格的质控检测,确保该产品具有最高的活性和纯度。详情请登陆 www.neb.com 或 www.neb-china.com。 

单位定义

1 单位指在 20 μl 反应体系中,在 16℃ 反应条件下,30 分钟能使 50% 的经 HindIII 消化的 λDNA 片段 [5´ 端浓度为 0.12 μM(300 μg/ml)] 连接所需的酶量。单位活性检测条件请登陆 www.neb.com 或 www.neb-china.com 

浓度

10,000 units/ml。 

注意事项

本酶以 NAD+(烟酰胺腺嘌呤二核苷酸)作为辅因子。
该酶对平末端片段的连接效率极低,平末端的连接请用平末端/TA 连接酶预混液(NEB #M0367)或快速连接试剂盒(NEB #M2200)。 

参考文献

关于该酶特性和产品应用的参考文献,请登陆 www.neb.com 或 www.neb-china.com。 

Taq DNA 连接酶 货 号 #M0208L-NEB酶试剂 New England Biolabs

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Taq DNA 连接酶                              收藏

Taq DNA 连接酶                货   号                  #M0208L Taq DNA 连接酶                货   号                  #M0208L Taq DNA 连接酶                货   号                  #M0208L Taq DNA 连接酶                货   号                  #M0208L

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#M0208L
10,000 units
3,549.00

#M0208S
2,000 units
889.00

#M0208V
1,000 units
469.00

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特性

 耐热性好
 dsDNA 切刻修复
 用于 Gibson 组装方法 
 可用连接酶链式反应和连接酶检测反应对等位基因进行特异性检测

概述

相邻 DNA 链的 5´-磷酸末端和 3´-羟基末端形成磷酸二酯键。该连接反应只有当两条寡核苷酸链与互补靶 DNA 完全配对,并且两条寡核苷酸链之间没有空隙的条件下才可发生。因此,可以用它来检测单碱基替换。Taq DNA 连接酶以 NAD 为辅因子。在 37-75℃ 范围内,Taq DNA 连接酶均有活性。

来源

纯化自重组 E. coli 菌株,含有自 Thermus aquaticus HB8 中克隆的连接酶基因。 

反应条件

1X Taq DNA 连接酶反应缓冲液
[20 mM Tris-HCl(pH 7.6 @ 25℃),25 mM KAc,10 mM Mg(Ac)2,10 mM DTT,1 mM NAD 和 0.1% Triton X-100],45℃ 温育。 

该酶需 NAD+ 作辅因子,在 10X Taq DNA 连接酶缓冲液中已添加 NAD+为了延长 NAD+ 的半衰期,缓冲液应于 -70℃ 贮存。

质保声明

Taq DNA 连接酶经过严格的质控检测,确保该产品具有最高的活性和纯度。详情请登陆 www.neb.com 或 www.neb-china.com。 

单位定义(粘性末端活性单位)

1 单位指 50 μl 反应体系中,45℃ 条件下,15 分钟内能使 50% 的 1 μg 经 BstEII 消化的 λDNA 片段(12 bp 粘性末端)发生连接所需要的酶量。单位活性检测条件请登陆 www.neb.com 或 www.neb-china.com。 

浓度

40,000 units/ml。 

注意事项

Taq DNA 连接酶可以有效连接 12 bp 的互补片段,但却无法连接 4 bp 的互补片段(典型限制酶消化产物)。

参考文献

关于该酶性质和产品应用的参考文献,请登陆 www.neb.com 或 www.neb-china.com。 

9°N™ DNA 连接酶 货 号 #M0238S-NEB酶试剂 New England Biolabs

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9°N™ DNA 连接酶                              收藏

9°N™ DNA 连接酶                货   号                  #M0238S 9°N™ DNA 连接酶                货   号                  #M0238S 9°N™ DNA 连接酶                货   号                  #M0238S 9°N™ DNA 连接酶                货   号                  #M0238S

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#M0238S
2,500 units
909.00

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特性

 可在高温条件下,连接 DNA 链上的切刻位点
 耐热性好
 可用连接酶检测反应和连接酶链式反应对等位基因进行特异性检测

概述

9°N™ DNA 连接酶耐热性好,能够催化磷酸二酯键的形成,使与同一互补靶 DNA 链杂交的两条相邻寡核苷酸链的 5´ -磷酸末端和 3´ -羟基末端通过磷酸二酯键相连。该连接反应只有当两条寡核苷酸链与互补靶 DNA 完全配对,并且两条寡核苷酸链之间没有空隙的条件下才可发生。9°N™DNA 连接酶以 ATP 为辅因子。该酶在 45-70℃ 范围内均有活性。 

来源

纯化自重组 E. coli 菌株,其携带有从极度耐热的海底超嗜热古菌(Thermococcus sp.)9°N 菌株中克隆的连接酶基因。 

反应条件

1X 9°N DNA 连接酶反应缓冲液
[10 mM Tris-HCl,600 μM ATP,2.5 mM MgCl2,2.5 mM DTT,0.1% Triton X-100(pH 7.5 @ 25℃)],45℃ 温育。 

质保声明

9°N DNA 连接酶经过严格的质控检测,确保该产品具有最高的活性和纯度。详情请登陆 www.neb.com 或www.neb-china.com。 

单位定义(粘性末端活性单位)

1 单位指 50 μl 反应体系中,45℃ 条件下,15 分钟内能使 50% 的 1 μg 经 BstEII 消化的 λDNA 片段(12 bp 粘性末端)发生连接所需要的酶量。粘性末端活性单位相当于切刻封闭单位。单位活性检测条件请登陆 www.neb.com 或 www.neb-china.com。 

浓度

40,000 units/ml。 

注意事项

该酶可以有效连接 12 bp 的互补片段,但却无法连接 4 bp 的互补片段(典型限制酶消化产物)。 

参考文献

关于该酶性质和产品应用的参考文献,请登陆 www.neb.com 或 www.neb-china.com。 

T3 DNA 连接酶 货 号 #M0317L-NEB酶试剂 New England Biolabs

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T3 DNA 连接酶                              收藏

T3 DNA 连接酶                 货   号                  #M0317L T3 DNA 连接酶                 货   号                  #M0317L T3 DNA 连接酶                 货   号                  #M0317L T3 DNA 连接酶                 货   号                  #M0317L T3 DNA 连接酶                 货   号                  #M0317L

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#M0317L
750,000 units
3,469.00

#M0317S
100,000 units
859.00

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特性

 连接粘性末端或平末端
 高盐耐受力
 dsDNA 切刻修复 

概述

T3 DNA 连接酶来源于 T3 噬菌体,是 ATP 依赖型双链 DNA 连接酶,可以有效催化粘性末端、平齐末端和切刻的连接。加入 PEG 6000 可提高平齐末端连接效率。T3 DNA 连接酶在反应中对 NaCl 的耐受性是 T4 DNA 连接酶的 2 倍,因此,当体外分子生物学实验中需要考虑实验离子浓度下 DNA 连接酶活性时,就多了一个选择。 

来源

重组 E. coli 质粒,含有 T3 DNA 连接酶编码基因。 

反应条件

1X T3 DNA 连接酶反应缓冲液
[66 mM Tris-HCl,1 mM ATP,10 mM MgCl2,1 mM DTT,7.5% PEG 6000(pH 7.6 @ 25℃)],25℃ 温育。 

质保声明

T3 DNA 连接酶经过严格的质量控制检测,以确保最高的纯度和反应效率。详情请登陆www.neb.com 或 www.neb-china.com。 

单位定义

1 单位是指在 20 μl 总反应体系中,1X T3 DNA 连接酶反应缓冲液条件下,25℃ 温育 1 分钟,能使 50% 的 100 ng 经 HindIII 消化的 λDNA 连接所需的酶量。 

浓度

3,000,000 units/ml。 

注意事项

ATP 是必需的辅因子。
当某些实验不能用 PEG 6000 时,可使用 T4 DNA 连接酶缓冲液,但活性会降低 10 倍。切记反应时体系内一定要有终浓度为 1 mM 的 ATP。需要维持高 NaCl 浓度的实验,建议使用不含 PEG 6000 的缓冲液。
65℃ 加热 10 分钟可使 T3 DNA 连接酶失活。如果反应缓冲液中含有 PEG,该酶不能加热失活,否则会抑制后续转化实验。 

参考文献

T7 DNA 连接酶 货 号 #M0318L-NEB酶试剂 New England Biolabs

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T7 DNA 连接酶                              收藏

T7 DNA 连接酶                 货   号                  #M0318L T7 DNA 连接酶                 货   号                  #M0318L T7 DNA 连接酶                 货   号                  #M0318L T7 DNA 连接酶                 货   号                  #M0318L T7 DNA 连接酶                 货   号                  #M0318L

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#M0318L
750,000 units
3,319.00

#M0318S
100,000 units
829.00

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特性

 仅用于连接粘性末端
 dsDNA 切刻修复 

概述

T7 DNA 连接酶来源于 T7 噬菌体,它是一种 ATP 依赖型双链 DNA 连接酶,该酶可催化双链 DNA 相邻 5´ 磷酸末端和 3´ 羟基基团之间形成磷酸二酯键。T7 DNA 连接酶可以有效地催化粘性末端和切刻的连接。与 T4 和 T3 DNA 连接酶不同,T7 DNA 连接酶不能有效地催化平末端连接。因此,在实验过程中,当平末端和粘性末端同时存在时,仅需粘性末端发生连接,T7 DNA 连接酶是理想的选择。 

来源

重组 E. coli 质粒,含有 T7 DNA 连接酶编码基因。 

反应条件

 1 X T7 DNA 连接酶反应缓冲液

[66 mM Tris-HCl,1 mM ATP,10 mM MgCl2,1 mM DTT,7.5% PEG 6000 (pH 7.6 @ 25℃)],25℃ 温育。

质保声明

T7 DNA 连接酶经过严格的质量控制检测,以确保最高的纯度和反应效率。详情请登陆 www.neb.com 或 www.neb-china.com。 

单位定义

1 单位是指在 20 μl 总反应体系中,1 X T7 DNA 连接酶反应缓冲液条件下,25℃ 温育 30 分钟,能使 50% 的 100 ng 经 HindIII 消化的 λDNA 片段连接所需的酶量。 

浓度

3,000,000 units/ml。 

注意事项

ATP 是必需的辅助因子。
当某些实验不能用 PEG 6000 时,可使用 T4 DNA 连接酶缓冲液,但活性会降低 10 倍。切记反应时体系内一定要有终浓度为 1 mM 的 ATP。
65℃ 加热 10 分钟可使 T7 DNA 连接酶失活。如果反应缓冲液中含有 PEG,该酶不能加热失活,否则会抑制后续转化实验。 

参考文献

平末端/TA 连接酶预混液 货 号 #M0367L-NEB酶试剂 New England Biolabs

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平末端/TA 连接酶预混液                              收藏

平末端/TA 连接酶预混液                货   号                  #M0367L 平末端/TA 连接酶预混液                货   号                  #M0367L 平末端/TA 连接酶预混液                货   号                  #M0367L 平末端/TA 连接酶预混液                货   号                  #M0367L

货 号
规 格
价 格(元)
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#M0367L
250 次反应
4,839.00

#M0367S
50 次反应
1,219.00

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特性

 连接平末端
 T/A 克隆
 dsDNA 切刻修复
 构建高丰度克隆文库
 连接粘性末端 

概述

平末端/TA 连接酶预混液是一种即用型 2X 预混液,内含 T4 DNA 连接酶、专属连接增强剂和经过优化的缓冲液。该预混液是专门为提高平末端和单碱基突出末端的连接和转化效率而设计,并简化了建立反应所需步骤,优化了酶和缓冲液的最佳比例,以确保稳定、高效的连接,室温下即可快速连接所有末端类型的 DNA。因为该预混液在 -20℃ 储存时为液体状态,所以使用时无需解冻。此外,即使当 DNA 量少且浓度低时仍可进行亚克隆连接,为用户节约宝贵的 DNA 样品,且无需稀释直接转化到多种化学感受态大肠杆菌中。 

来源

纯化自重组 E. coli 菌株,含有编码 T4 DNA 连接酶的基因。 

反应条件

在 10 μl 的反应体系中加入 1X 平末端/TA 连接酶预混液和 DNA 底物,25℃ 温育。10 μl 反应体系中包含 1,800 个 T4 DNA 连接酶粘性末端单位。 

质保声明

该产品经过严格的质量控制检测,以确保最高的纯度和反应效率。详情请登陆 www.neb.com 或 www.neb-china.com。 

注意事项

该预混液在 -20℃ 储存时为液体状态。-70℃ 保存时,反复冻融 20 次后,检测反应效率无明显变化。 

ElectroLigase® 电转连接酶 货 号 #M0369S-NEB酶试剂 New England Biolabs

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ElectroLigase® 电转连接酶                              收藏

ElectroLigase® 电转连接酶                货   号                  #M0369S ElectroLigase® 电转连接酶                货   号                  #M0369S ElectroLigase® 电转连接酶                货   号                  #M0369S ElectroLigase® 电转连接酶                货   号                  #M0369S

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#M0369S
50 次反应
1,489.00

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特性

 电转化的最佳连接酶
 载体构建
 接头连接
 片段组装
 文库构建
 TA 克隆 

概述

电转连接酶由 T4 DNA 连接酶和经过优化的即用型 2X 缓冲液组成,其缓冲液内含专属连接增强剂,不含 PEG。该组合专门用于促进各种 DNA 末端(平末端、粘性末端、TA 末端)的高效连接。无需脱盐和纯化,电转连接酶可直接用于电转化的细胞。因为其缓冲液在 -20℃ 储存时为液体状态,所以使用时无需解冻,从而简化了反应起始步骤。通过优化酶和缓冲液的比例,室温下即可快速连接所有末端类型的 DNA。即使当 DNA 量少且浓度低时仍可进行亚克隆连接,从而节省了用户宝贵的 DNA 样品。此外,无需稀释和纯化,反应液可直接转化多种电转感受态大肠杆菌。 

来源

纯化自重组 E. coli 菌株,含有编码 T4 DNA 连接酶的基因。 

反应条件

11 μl 反应体系,加入 1X 电转连接酶反应缓冲液、DNA 底物和 1 μl 电转连接酶,25℃ 温育 30 分钟。 

质保声明

电转连接酶经过严格的质量控制检测,以确保最高的纯度和反应效率。详情请登陆www.neb.com 或 www.neb-china.com。 

注意事项

该产品在 -20℃ 储存时为液体状态。 

瞬时粘性末端连接酶预混液 货 号 #M0370L-NEB酶试剂 New England Biolabs

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产品资料 – DNA修饰酶与克隆技术 – DNA 连接酶

瞬时粘性末端连接酶预混液                              收藏

瞬时粘性末端连接酶预混液               货   号                  #M0370L 瞬时粘性末端连接酶预混液               货   号                  #M0370L 瞬时粘性末端连接酶预混液               货   号                  #M0370L

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#M0370L
250 次反应
4,799.00

#M0370S
50 次反应
1,199.00

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特性

 瞬时连接粘性末端
 dsDNA 切刻修复
 构建高丰度克隆文库 

概述

瞬时粘性末端连接酶预混液是一种即用型 2X 预混液,内含 T4 DNA 连接酶、专属连接增强剂和经过优化的缓冲液。该预混液是专门为瞬时连接粘性末端(2-4 bp)和提高转化效率而设计,它还简化了建立反应所需的步骤,优
化了酶和缓冲液的比例。因为该预混液在 -20℃ 储存时为液体状态,所以使用时无需解冻,特别是无需温育时间就能高效连接粘性末端底物,反应时仅需加入预混液及互补末端 DNA,混匀后转化,从而节省了克隆连接反应的时间。此外,亚克隆连接可以以低浓度在很小的体系里完成,节省用户宝贵的 DNA 样品,并且无需稀释可直接转化到多种化学感受态大肠杆菌中。 

来源

纯化自重组 E. coli 菌株,含有编码 T4 DNA 连接酶的基因。

反应条件

在 10 μl 反应体系中加入 1X 瞬时粘性末端连接酶预混液和 DNA 底物。10 μl 反应体系中包含 1,800 个 T4 DNA 连接酶粘性末端单位。 

质保声明

该试剂经过严格的质量控制检测,以确保酶的高纯度和高效率。详情请登陆 www.neb.com 或 www.neb-china.com。 

注意事项

该预混液在 -20℃ 储存时为液体状态。-70℃ 保存时,反复冻融 20 次后,检测反应效率无明显变化。 

SplintR® 连接酶 货 号 #M0375L-NEB酶试剂 New England Biolabs

上海金畔生物科技有限公司代理New England Biolabs(NEB)酶试剂全线产品,欢迎访问官网了解更多产品信息和订购。

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SplintR® 连接酶                              收藏

SplintR® 连接酶               货   号                  #M0375L SplintR® 连接酶               货   号                  #M0375L SplintR® 连接酶               货   号                  #M0375L

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#M0375L
6,250 units
5,379.00

#M0375S
1,250 units
1,199.00

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特性

 连接被互补 RNA 固定的相邻的单链 DNA
 鉴定 miRNAs 和 mRNAs,包括 SNPs 

概述

SplintR 连接酶也称为 PBCV-1 DNA 连接酶或 Chorella 病毒 DNA 连接酶,它能够高效催化相邻的 DNA 核苷酸的连接,这个连接过程需要一条互补的 RNA 在两条 DNA 单链间起“夹板”或“桥梁”的固定作用。这种以前没有报道过的活性可能推动一些创新性 miRNAs 和 mRNAs,包括 SNPs 的分析方法。在二代测序和分子诊断等众多领域中,SplintR 是富集目的基因的理想选择。它具有稳定的生物活性,对 RNA 介导固定的 DNA 底物亲和性强(米氏常数 Km = 1 nM),能够在复杂的混合物中检测到亚纳摩尔级的特定 RNA。因此,在 RNA 检测技术中,SplintR 连接酶不失为最佳选择用酶。 

来源

来自重组的 E. coli 菌株,其携带编码 PBCV-1 DNA 连接酶的基因。 

反应条件

1X SplintR 连接酶反应缓冲液,25℃ 温育,最佳连接温度是 16℃。 
热失活:65℃ 温育 20分钟。

质保声明

SplintR 连接酶经过严格的质控检测,确保该产品具有最高的活性和纯度。详情请登陆 www.neb.com 或 www.neb-china.com。 

单位定义(粘性末端活性单位)

1 单位指 20 μl 反应体系中,1X SplintR 连接酶反应缓冲液,25℃ 条件下,15 分钟内能使 2 pmol(完成 50%)三重 FAM 标记的 DNA:RNA 杂交底物连接所需的酶量。单位活性检测条件请登陆 www.neb.com 或 www.neb-china.com。 

浓度

25,000 units/ml。 

参考文献

关于该酶特性和产品应用的参考文献,请登陆 www.neb.com 或 www.neb-china.com。 

Salt-T4™ 耐盐 DNA 连接酶 货 号 #M0467L-NEB酶试剂 New England Biolabs

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Salt-T4 耐盐 DNA 连接酶                              收藏

Salt-T4™ 耐盐 DNA 连接酶               货   号                  #M0467L Salt-T4™ 耐盐 DNA 连接酶               货   号                  #M0467L Salt-T4™ 耐盐 DNA 连接酶               货   号                  #M0467L

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#M0467L
100,000 units
3,139.00

#M0467S
20,000 units
779.00

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特性

  • Salt-T4 耐盐 DNA 连接酶是 T4 DNA 连接酶经基因工程改造过的酶,与 T4 DNA 连接酶相比提高了耐盐性
  • 不仅能够连接平末端和粘性末端,还能修复双链 DNA 和 DNA/RNA 杂交链的单链切刻
  • 随酶提供 T4 DNA 连接酶缓冲液和 StickTogether™ DNA 连接酶缓冲液

概述

 Salt-T4 耐盐 DNA 连接酶作为 T4 DNA 连接酶的耐盐变体,该酶催化双链 DNA 或 RNA 上相邻的5´ -磷酸末端和 3´-羟基末端形成磷酸二酯键,比野生型T4 DNA连接酶更耐受高盐条件。该酶在盐浓度高达300mM的情况下仍能连接粘性末端而不丧失任何活性。该酶对其他反应组分(载体或插入片段)携带的盐不敏感,并允许连接反应在盐含量较高的替代反应缓冲液(如 NEBuffer 3.1)中进行。

 

图1:与T4 DNA连接酶相比,Salt-T4 耐盐 DNA 连接酶在粘性末端底物上表现出更高的耐盐性

Salt-T4™ 耐盐 DNA 连接酶               货   号                  #M0467L

 

在 25℃ 条件下,用 400 单位的 T4 DNA 连接酶(NEB # M0202)或 Salt-T4 耐盐 DNA 连接酶(NEB #   M0467)与 0.12 µM 荧光标记的 HindIII(粘性末端)酶切片段在盐量增加(0-1000 mM NaCl)的 1 x T4
DNA 连接酶缓冲液中温育 10 分钟。连接产物用毛细管电泳检测。

 

当盐浓度超过 200 mM 时,T4 DNA连接酶的活性迅速丧失,而在盐浓度高达 500 mM时,Salt-T4 耐盐
DNA 连接酶在粘性末端底物上仍保留了 > 60% 的活性。

来源
纯化自表达 Salt- T4 耐盐 DNA连接酶基因的 E. coli
 
反应条件
1X T4 DNA 连接酶反应缓冲液(50 mM Tris-HCl,10 mM MgCl2,10 mM DTT,1 mM ATP,(pH 7.5 @ 25℃)) ,25℃ 温育。
 
热失活
65℃ 加热 10 分钟。
 
质保声明
Salt-T4 耐盐 DNA 连接酶经过严格的质控检测,确保该产品具有最高的活性和纯度。详情请登陆www.neb.com 或 www.neb-china.com。
 
单位定义(粘性末端活性单位)
1 单位指在 20 µl 反应体系中,含 100 mM NaCl 的 1X T4 DNA 连接酶反应缓冲液条件下,25℃ 温育 30 分钟,能使 50% 的 6 µg 经 HindIII 消化的 λDNA 连接所需的酶量。
 
浓度
400,000 units/ml。
 
注意事项
1、与 E. coli DNA 连接酶需要 NAD+ 作辅因子不同,Salt-T4 耐盐 DNA 连接酶的辅因子是 ATP。
2、若需稀释 T4 DNA 连接酶,推荐使用 50% 甘油贮存缓冲液(稀释缓冲液 A,NEB #B8001S)稀释,
-20℃ 保存。如稀释后马上使用,也可用 1X T4 DNA 连接酶反应缓冲液稀释。
3、室温连接
为了方便,可在室温(20-25℃)进行连接。连接粘性末端(1 x T4 DNA 连接酶缓冲液):在 20 µl 反应体系中加入 1 µl Salt-T4 耐盐 DNA 连接酶,反应 10 分钟。连接平末端或单碱基突出末端
(1 x StickTogether DNA 连接酶缓冲液):在 20 µl 反应体系中加入 1 µl Salt-T4 耐盐 DNA 连接酶,反应 10 分钟。不要用加热来终止反应,因为 StickTogetherDNA连接酶缓冲液里的 PEG 受热会抑制转化。
 
参考文献
该产品的特性和应用的参考文献,请登陆 www.neb.com 或 www.neb-china.com。

固定化 T4 DNA 连接酶 货 号 #M0569S-NEB酶试剂 New England Biolabs

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固定化 T4 DNA 连接酶                              收藏

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#M0569S
1.1 mg
3,379.00

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产品特点

· 固定化 T4 DNA 连接酶(IM T4 DNA Ligase)由 T4 DNA 连接酶和磁珠组成,两者由共价键连接。

· 使用磁力可轻松去除反应中的酶
· 避免热失活步骤对下游应用的干扰
· 固定化酶可重复使用
· 开启新的工作流程和应用
 

产品说明

 T4 DNA 连接酶催化双链 DNA RNA 上相邻的 5´-磷酸基末端和 3´-羟基末端形成磷酸二酯键。该酶不仅能够催化平末端或粘性末端之间的连接,还可以修复双链 DNARNA DNA/RNA 杂交双链中的单链切刻(1)。

固定化 T4 DNA 连接酶(IM T4 DNA Ligase)是包被有 T4 DNA 连接酶的磁珠悬浮液,以 10 mg/ml 的溶液(50% 甘油)提供,每微升溶液的有效浓度为 60 粘性末端单位CEU)。反应完成后,体系中的酶可使用磁力去除,然后可重复使用。

  固定化 T4 DNA 连接酶在不同温度下的相对活性

Temperature

% Activity

16ºC

100%

25ºC

100%

37ºC

50%

 

固定化 T4 DNA 连接酶在不同 NEB 缓冲液中的活性

固定化 T4 DNA 连接酶            货   号                  #M0569S

 

图 1:固定化 T4 DNA 连接酶成功连接 Lambda DNA-HindIII 消化产物

 

固定化 T4 DNA 连接酶            货   号                  #M0569S

根据产品说明书推荐步骤,分别使用无连接酶、可溶性 T4 DNA 连接酶(NEB #M0202)、固定化 T4 DNA 连接酶(NEB #M0569)对 Lambda DNA- HindIII 消化产物(NEB #N3012)进行连接。结果显示,可溶性酶和固定化酶的连接效果一致。

 

图 2:固定化 T4 DNA 连接酶可重复使用

固定化 T4 DNA 连接酶            货   号                  #M0569S

将固定化 T4 DNA 连接酶(NEB #M0569)置于快连缓冲液中,对 Nanopore 接头进行连续夹板连接,数据显示:经过 20 次连续连接反应后,酶活仍不受影响。

 

Taq 高保真 DNA 连接酶 货 号 #M0647S-NEB酶试剂 New England Biolabs

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Taq 高保真 DNA 连接酶                              收藏

Taq 高保真 DNA 连接酶               货   号                  #M0647S Taq 高保真 DNA 连接酶               货   号                  #M0647S Taq 高保真 DNA 连接酶               货   号                  #M0647S

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#M0647S
50 次反应
1,879.00

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特性

 高保真,耐热性好
 dsDNA 切刻修复
 可用连接酶链式反应(LCR)和连接酶检测反应(LDR)对等位基因进行特异性检测
 锁式探针连接
 为方便计算连接温度,请登陆 Ligasecalc.neb.com 使用 Thermostable Ligase Reaction Temperature Calculator在线工具。

概述

Taq 高保真 DNA 连接酶含热稳定 DNA 连接酶和专属试剂,具有无以伦比的保真性,能高保真且高效地连接 DNA 切刻。在优化的缓冲液体系中,该酶将与靶 DNA 互补的相邻 5´-磷酸基和 3´-羟基的切刻位点以磷酸二酯键进行连接,极大程度降低了错配率。改良的配方使得该产品可以更好的识别连接反应供体和受体,从而可以精确检测 SNPs 和其他等位基因变异。Taq 高保真 DNA 连接酶在 37–75℃ 温度范围内都有活性。

来源

 纯化自重组的 E. coli 菌株,携带有克隆自嗜热菌的连接酶基因。

反应条件

1X Taq 高保真 DNA 连接酶反应缓冲液
[20 mM Tris-HCl,150 mM KCl,10 mM MgCl2,10mM DTT,1 mM NAD 和 0.1% Triton X-100(pH 8.5 @25℃)],25℃ 温育。

质保声明

Taq 高保真 DNA 连接酶经过严格的质控检测,确保该产品具有最高的活性和纯度。详情请登陆 www.neb.com 或 www.neb-china.com。

参考文献

关于该酶性质和产品应用的参考文
献,请登陆 www.neb.com 或 www.neb-china.com。

NEBridge™ 连接酶预混液 货 号 #M1100S-NEB酶试剂 New England Biolabs

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NEBridge 连接酶预混液                              收藏

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#M1100S
50 reactions
1,069.00

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产品特点

·试剂盒经优化设计,适用于高效准确的 Golden Gate 组装

·3X 预混液剂型,使用便捷
·搭配 NEB IIS 型限制性内切酶使用
·用于无缝克隆 — 组装后不存在残余序列
·适用于在单个反应中同时进行多片段 (2-25+) 有序组装
·也可用于单片段克隆和文库构建
·Golden Gate 免费设计软件请点击 GoldenGate.neb.com
·连接酶保真度查询工具请点击 Ligase Fidelity Tools(用于设计高保真 Golden Gate 组装)
     
     NEBridge 连接酶预混液为使用者提供更加灵活和便利的试剂,搭配 NEB IIS 型限制性内切酶,可高效和高保真的完成 Golden Gate 组装。

产品描述

 NEBridge 连接酶预混液为 3X 浓度剂型,适用于 Golden Gate 组装。该预混液专门设计用于搭配 NEB IIS 型限制性内切酶使用,经优化的反应缓冲液含有 T4 DNA 连接酶和专有的连接增强剂。用户只需选择 NEB IIS 型限制性内切酶,并添加组装的 DNA 底物即可。该产品与其操作方案可支持简单的单片段插入,也支持中等复杂(3–6 个片段)和高度复杂(7–25+ 个片段)的片段组装。

NEBridge™ 连接酶预混液            货   号                  #M1100S

图示:使用 NEBridge 连接酶预混液和传统 T4 DNA 连接酶缓冲液对 lac 基因 进行 25 片段的 Golden Gate 组装

NEBridge™ 连接酶预混液            货   号                  #M1100S

A:使用 NEBridge 连接酶预混液进行 25 个片段组装的原理图
B:使用 BbsI-HF (NEB #R3539M)、24 个插入片段和 pGGAselect 质粒建立 30 µl 反应体系。左图为使用 10 µl NEBridge 连接酶预混液的结果。右图为使用 3 µl 10X T4 DNA 连接酶缓冲液 (NEB #B0202) 和 1 µl T4 DNA 连接酶 (NEB #M0202T/M) 的结果。两个反应分别加 1 µl BbsI-HF,以及 24 个插入片段和 pGGAselect 质粒(每种 0.05 pmol)。反应在 37℃ 5 分钟和 16℃ 5 分钟下进行 60 个循环,最后 60℃ 孵育 5 分钟。每个反应取 2 µl 产物转入 50 µl T7 表达 E. coli 感受态细胞 (NEB #C2566)。取 50 µl 菌液涂 LB 平板(含 1 mg/ml 葡萄糖、1 mg/ml MgCl2、30 µg/ml 氯霉素、200 µM IPTG 和 80 µg/ml X-gal),37℃ 孵育 18 小时,4℃ 储存 4 小时,最后对菌落颜色进行观测和记录。
C:结果展示了总转化株和正确组装转化株(蓝色菌落)百分比的平均值(三个重复),以及平均值的标准偏差。使用 NEBridge 连接酶预混液时,每微克载体 DNA 产生 2.2±0.2X106 个正确组装的蓝色菌落,保真度为 94.3±1%,使用 T4 DNA 连接酶缓冲液时,每微克载体 DNA 产生 8.3±2.1X105 个正确组装的蓝色菌落,保真度为 69.8±10.7% 保真度。
 

Hi-T4™ 耐热 DNA 连接酶 货 号 #M2622L-NEB酶试剂 New England Biolabs

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Hi-T4™ 耐热 DNA 连接酶                              收藏

Hi-T4™ 耐热 DNA 连接酶               货   号                  #M2622L Hi-T4™ 耐热 DNA 连接酶               货   号                  #M2622L Hi-T4™ 耐热 DNA 连接酶               货   号                  #M2622L

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苏州库存

#M2622L
100,000 units
3,169.00

#M2622S
20,000 units
789.00

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特性

  •  Hi-T4 耐热 DNA 连接酶是 T4 DNA 连接酶经基因工程改造过的酶,与 T4 DNA 连接酶相比,改善了热稳定性
  • 不仅能够连接平末端和粘性末端,还能修复双链 DNA 和 DNA/RNA 杂交链的单链切刻
  • 随酶提供 T4 DNA 连接酶缓冲液和 StickTogether™ DNA 连接酶缓冲液

概述

 Hi-T4™ 耐热 DNA 连接酶是 T4 DNA 连接酶的耐热变体,该酶催化双链 DNA 或 RNA 上相邻的 5´ – 磷酸末端和 3´ – 羟基末端形成磷酸二酯键,经过改造其作用温度高于野生型 T4 DNA 连接酶。Hi-T4 耐热 DNA 连接酶可在温度高达 50ºC 时进行平末端和粘性末端的连接以及修复双链 DNA 、RNA 或
DNA / RNA 杂交链的单链切刻。

图1:Hi-T4 耐热 DNA 连接酶比普通 T4 DNA 连接酶热稳定性更好

Hi-T4™ 耐热 DNA 连接酶               货   号                  #M2622L

45℃ 温度下,将 400 单位 T4 DNA 连接酶(NEB #M0202)或 Hi-T4 耐热 DNA
连接酶(NEB #M2622)与 1X T4 DNA 连接酶缓冲液,在无底物情况下预加热
如图所示时间后,所剩酶活进行如下检测:添加 0.12 µM 荧光标记的 HindIII
粘性末端片段 37℃ 温育 15 分钟,连接产物用毛细管电泳检测。
T4 DNA 连接酶在 45℃ 条件下,逐渐失去活性,而 Hi-T4 耐热 DNA 连接酶
即使在 45℃ 温育 72小时,对粘性末端底物仍有 100% 的活性。
 
图2:Hi-T4 耐热 DNA 连接酶比普通 T4 DNA 连接酶更耐热循环
 
Hi-T4™ 耐热 DNA 连接酶               货   号                  #M2622L
在 1X T4 DNA连接酶缓冲液中,分别用 1000 单位的 T4 DNA 连接酶(NEB#
M0202)或 Hi-T4 耐热 DNA 连接酶(NEB# M2622)与 1 µg pBR322 进行循环
温育。循环温度设置为:42℃(A)或 50℃(B) 5 分钟,16℃ 5 分钟,
循环数如图显示:0、15、30、45、60。所剩酶活检测如下:25℃ 条件下,连
接荧光标记的 HindIII 粘性末端片段 10 分钟,连接产物用毛细管电泳检测。
相比于循环开始前的所剩酶活见图。
A. T4 DNA 连接酶在 16℃ 和 42℃ 循环温育时逐渐失去活性(金线,A),然
而 Hi-T4 耐热 DNA连接酶在 16℃ 和 42℃ 循环温育 60 次后仍保持活性
(橙色线,A)。
B. T4 DNA 连接酶在 16℃ 和 50℃ 循环温育 15 次后(金线,B)就完全失
活,然而 Hi-T4 耐热 DNA 连接酶在 16℃ 和 50℃ 循环温育 60 次(橙色
线,B)后仍保留 60% 左右的活性。
来源
重组表达纯化。
 
反应条件
1X T4 DNA 连接酶反应缓冲液(50 mM Tris-HCl,10 mM MgCl2,10 mM DTT,1 mM ATP,(pH 7.5 @ 25℃)),25℃ 温育。
 
热失活
65℃ 加热 10 分钟。
 
质保声明
Hi-T4 耐热 DNA 连接酶经过严格的质控检测,确保该产品具有最高的活性和纯度。详情请登陆
www.neb.com 或 www.neb-china.com。
 
单位定义(粘性末端活性单位)
1 单位指在 20 µl 反应体系中,25℃ 反应条件下,30 分钟能使 50% 的 6 µg经 HindIII 消化的λDNA 连接所需的酶量。
 
浓度
400,000 units/ml。
 
注意事项
1、与 E. coli DNA 连接酶需要 NAD+ 作辅因子不同,Hi-T4 耐热 DNA 连接酶的辅因子是 ATP。
2、若需稀释 Hi-T4 耐热 DNA 连接酶,推荐使用 50% 甘油贮存缓冲液稀释(稀释缓冲液A,
NEB #B8001S),-20℃ 保存。如稀释后马上使用,也可用 1X T4 DNA 连接酶反应缓冲液稀释。
3、连接温度
连接粘性末端(1 x T4 DNA 连接酶缓冲液):在 20 µl 反应体系中加入 1 µl Hi-T4 DNA 连接酶,25 – 50ºC 温育 10 分钟。连接平末端或单碱基突出末端(1 x StickTogether DNA 连接酶缓冲液):在 20 µl 反应体系中加入 1 µl Hi-T4 耐热 DNA 连接酶,25 – 50ºC 温育 10 分钟。不要用加热来终止反应,因为
StickTogether DNA连接酶缓冲液里的 PEG 受热会抑制转化。
 
参考文献
该产品的特性和应用的参考文献,请登陆 www.neb.com 或 www.neb-china.com。
 

 

 

T4 RNA 连接酶 1(ssRNA 连接酶) 货 号 #M0204L-NEB酶试剂 New England Biolabs

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产品资料 – RNA 试剂 – RNA 连接酶和修饰酶

T4 RNA 连接酶 1(ssRNA 连接酶)                              收藏

T4 RNA 连接酶 1(ssRNA 连接酶)                货   号                  #M0204L T4 RNA 连接酶 1(ssRNA 连接酶)                货   号                  #M0204L T4 RNA 连接酶 1(ssRNA 连接酶)                货   号                  #M0204L T4 RNA 连接酶 1(ssRNA 连接酶)                货   号                  #M0204L

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相关产品

5´ -三磷酸腺苷(ATP)
通用 miRNA 克隆接头

特性

 连接单链 RNA 和 DNA
 用 5´ -[32P] pCp 进行 RNA 3´ 末端标记
 RNA 和 DNA 分子内及分子间的连接
 合成单链寡脱氧核苷酸
 蛋白质中掺入非天然氨基酸 

概述

催化 3´ →5´ 磷酸二酯键的形成,使核苷酸的 5´ -磷酸末端和 3´ -羟基末端连接,伴随着 ATP 水解为 AMP 和 PPi。作用底物包括单链 RNA、DNA 及二核苷焦磷酸。 

来源

携带 T4 RNA 连接酶 1 基因的 E. coli 菌株。 

反应条件

1X T4 RNA 连接酶反应缓冲液[50 mM Tris-HCl (pH 7.5 @ 25℃),10 mM MgCl2,1 mM DTT],加入 1 mM ATP,37℃ 温育。热失活:65℃ 15 分钟或煮沸 2 分钟。 

使用注意事项

pCp 的连接需要加入终浓度为10%(v/v)的 DMSO。 

随酶提供试剂

10X T4 RNA 连接酶反应缓冲液
10 mM ATP(NEB #M0204中包含)或 100 mM
 ATP(NEB #M0437中包含)
 50% PEG 8000 

质保声明

无单链 DNA 核酸外切酶、核酸内切酶、RNase 和磷酸酶污染。 

单位定义

1 单位指 37℃ 条件下,30 分钟内将 1 nmol 的 5´ -[32P] rA16 转化成磷酸盐不溶物所需要的酶量。单位活性检测条件请登陆 www.neb-china.com 或  

浓度

10,000 或 30,000 units/ml。 

参考文献

有关该产品特性和应用的参考文献请联系我们。  

T4 RNA 连接酶 2(dsRNA 连接酶) 货 号 #M0239L-NEB酶试剂 New England Biolabs

上海金畔生物科技有限公司代理New England Biolabs(NEB)酶试剂全线产品,欢迎访问官网了解更多产品信息和订购。

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T4 RNA 连接酶 2(dsRNA 连接酶)                              收藏

T4 RNA 连接酶 2(dsRNA 连接酶)                货   号                  #M0239L T4 RNA 连接酶 2(dsRNA 连接酶)                货   号                  #M0239L T4 RNA 连接酶 2(dsRNA 连接酶)                货   号                  #M0239L T4 RNA 连接酶 2(dsRNA 连接酶)                货   号                  #M0239L

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#M0239S
150 units
889.00

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特性

 连接粘性末端接头
 连接双链 RNA 中切刻的最佳选择
 可用于 DNA/RNA 杂交链中,RNA 3´ 羟基与 DNA 5´ 磷酸基的连接 

概述

T4 RNA连接酶 2,也被称为 T4 Rnl2gp24.1),同时具有 RNA 链分子间和分子内连接活性。与 T4 RNA 连接酶 1NEB #M0204)不同的是, T4 RNA 接酶 2 对双链 RNA 切刻的连接活性要明显高于对单链 RNA 的末端连接。该酶也可用于连接双链结构中 RNA 3´ 羟基和 DNA 5´ 磷酸基的切刻。
 

来源

纯化自携带 T4 RNA 连接酶 2 基因的重组 E. coli 菌株。 

反应条件

1X T4 RNA 连接酶 2 反应缓冲液[50 mM Tris-HCl (pH 7.5 @ 25℃),2mM MgCl2,1 mM DTT,400 μM ATP],37℃ 温育。 

质保声明

无单链和双链 DNA 核酸内切酶、外切酶、 RNase 以及磷酸酶污染
 

单位定义

1 单位指 20 μl 反应体系中, 37℃ 条件下, 30 分钟完全连接 0.4 μg 23-mer 17-mer RNA等摩尔混合物所需的酶量。单位活性检测的检测条件请登录 www.neb-china.com www.neb.com
 

浓度

10,000 units/ml。 

参考文献

有关该产品特性和应用的参考文献请联系我们。 www.neb-china.com 或  

T4 RNA 连接酶 2,截短型 货 号 #M0242L-NEB酶试剂 New England Biolabs

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T4 RNA 连接酶 2,截短型                              收藏

T4 RNA 连接酶 2,截短型                货   号                  #M0242L T4 RNA 连接酶 2,截短型                货   号                  #M0242L T4 RNA 连接酶 2,截短型                货   号                  #M0242L T4 RNA 连接酶 2,截短型                货   号                  #M0242L

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相关产品

通用 miRNA 克隆接头

特性

 将预腺苷化的 DNA 或 RNA 序列标签连接到任何 RNA 3´ 末端
 将单链腺苷化引物连接至小 RNA 上,用于 cDNA 文库构建
 将单链腺苷化引物连接至 RNA 上,用于链特异 cDNA 文库构建 

概述

T4 RNA 连接酶 2,截短型(T4 Rnl2 截短型)可特异性地将 端预腺苷化的 DNA RNA连接到 RNA 3´ 末端。该酶连接时不需要 ATP,但需要预腺苷化底物。 T4 Rnl2 截短型的表达来自E. coli 质粒,该质粒编码 T4 RNA 连接酶 2 基因的前 249 个氨基酸。与全长的 T4 RNA 连接酶 2 同, T4 Rnl2 截短型不能将底物的 末端腺苷化,因此无法将 RNA DNA 磷酸末端连接到 RNA端。该酶即 Rnl21-249),可用于 microRNA 克隆中接头连接的优化,因为此酶只能利用腺苷化的引物,因此可以降低连接背景。
 

来源

携带 T4 RNA 连接酶 2, 截短型基因的重组 E. coli 菌株。 

反应条件

1X T4 RNA 连接酶反应缓冲液[50 mM Tris-HCl (pH 7.5 @ 25℃),10 mM MgCl2,1 mM DTT],25℃ 温育。热失活:65℃ 20 分钟。 

随酶提供的试剂

10X T4 RNA 连接酶反应缓冲液
50% PEG 8000 

质保声明

无单链和双链 DNA 核酸内切酶、外切酶、 RNase 以及磷酸酶的污染。
 

单位定义

200 单位指 20 μl 反应体系中, 25℃ 条件下, 1 小时将 80% 31-mer RNA 连接到预腺苷17-mer DNA 末端[miRNA 通用性克隆接头(NEB#S1315]末端所需的酶量。单位活性检测条件见www.neb-china.com www.neb.com
 

浓度

200,000 units/ml。 

参考文献

有关该产品特性和应用的参考文献请联系我们。 www.neb-china.com 或  

5´ App DNA/RNA 热稳定连接酶 货 号 #M0319L-NEB酶试剂 New England Biolabs

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5´ App DNA/RNA 热稳定连接酶                              收藏

5´ App DNA/RNA 热稳定连接酶               货   号                  #M0319L 5´ App DNA/RNA 热稳定连接酶               货   号                  #M0319L 5´ App DNA/RNA 热稳定连接酶               货   号                  #M0319L

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#M0319S
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相关产品

通用 miRNA 克隆接头

特性

 二代测序文库构建中连接单链 DNA 和腺苷化的 DNA 接头
 构建 small RNA 二代测序文库时,可在较高温度下连接预腺苷化的接头和 RNA 

概述

5´ App DNA/RNA 热稳定连接酶来自嗜热碱甲烷杆菌(Methanobacterium thermoautotrophicum),RNA 连接酶催化亚基的赖氨酸点突变体。该酶连接时不需要 ATP,但需要 预腺苷化的接头才能将其连接到 RNA 或单链 DNA 3´ OH 末端。该酶也可催化 端被 2´ -O-甲基化的 RNA 预腺苷化接头的连接反应。连接反应的最适反应温度60-65℃。连接酶的点突变体不能使 RNA 或单DNA 端磷酸腺苷化,因此降低非特异性的串联和环化。

该酶能在 65℃ 反应,此温度下降低了 RNA 二级结构对连接反应的制约。

来源

重组 E. coli 菌株,携带有 His 标签的 5´ AppDNA/RNA 连接酶基因。 

反应条件

1X NEBuffer 1 [10 mM Bis-Tris-Propane-HCl (pH 7.0 @ 25℃),10 mM MgCl2,1 mM DTT],65℃ 温育。 

质保声明

无单链和双链 DNA 核酸内切酶、核酸外切酶、 RNase 和磷酸酶污染。
 

浓度

20 μM。 

使用注意事项

建议连接单链 DNA 和预腺苷酸化接头时,使用含镁离子的 NEBuffer 1。 

参考文献

有关该产品性质及应用的相关文献请登陆  

T4 RNA 连接酶 2,截短型 K227Q 货 号 #M0351L-NEB酶试剂 New England Biolabs

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T4 RNA 连接酶 2,截短型 K227Q                              收藏

T4 RNA 连接酶 2,截短型 K227Q               货   号                  #M0351L T4 RNA 连接酶 2,截短型 K227Q               货   号                  #M0351L T4 RNA 连接酶 2,截短型 K227Q               货   号                  #M0351L

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#M0351L
10,000 units
3,219.00

#M0351S
2,000 units
799.00

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相关产品

通用 miRNA 克隆接头

 
 

特性

 将预腺苷化的 DNA 或 RNA 序列标签连接到任何 RNA 3´ 末端
 将腺苷化单链引物连接至小 RNA 上,用于 cDNA 文库构建
 将腺苷化单链引物连接至 RNA 上,用于链特异性 cDNA 文库构建 

概述

 
 

T4 RNA 连接酶 2,截短型 KQT4 Rnl2tr KQ能特异性将 末端预腺苷化的 DNA RNA 连接到RNA 3´ OH 末端。反应无需 ATP,但需预腺苷化接头。

T4 Rnl2tr KQ T4 RNA 连接酶 2,截短型(NEB#M0242)的双点突变体。 K227 的突变降低了赖氨酰腺苷化。由于降低了 T4 Rnl2tr 从接头将腺苷基团转移到 RNA 5´ 磷酸基的活性, K227Q 可以减少 T4 Rnl2tr 非特异性的连接(串联体和环)。T4 Rnl2tr K227Q 中进一步突变 R55K,提高了酶的连接活性,使其与野生型 T4 Rnl2tr 连接活性水平一致。

因为不再使用 ATP,而改用预腺苷化接头,同时降低赖氨酰腺苷化酶的活性,所以连接反应的背景可以降至最低。该酶已用于二代测序 Small RNA的文库构建中,优化了接头的连接过程。

 

来源

重组 E. coli 菌株,携带有 MBP 融合表达的质粒,该质粒克隆有含编码 T4 RNA 连接酶 2 的前249 个氨基酸序列。 T4 Rnl2tr K227Q 是将 227 位的赖氨酸突变为谷氨酸。 T4 Rnl2tr KQ 分别在 55 位置进行了突变,精氨酸突变为赖氨酸、赖氨酸突变为谷氨酰胺。
 
 

反应条件

1X T4 RNA 连接酶反应缓冲液[50 mM Tris-HCl (pH 7.5 @ 25℃),10 mM MgCl2,1 mM DTT],25℃ 温育。
热失活:65℃ 20 分钟。 

随酶提供的试剂

10X T4 RNA 连接酶反应缓冲液
50% PEG 8000 

质保声明

无单链和双链 DNA 核酸内切酶、外切酶、 RNase 以及磷酸酶的污染。
 

单位定义

200 单位指 20 μl 反应体系中, 25℃ 条件下, 1 小时能将 80% 31-mer RNA 连接到预腺苷化 17-mer DNA 末端 [miRNA 通用克隆接头(NEB#S1315] 所需的酶量。单位活性检测条件请登www.neb-china.com www.neb.com
 

浓度

200,000 units/ml。 

参考文献

有关该产品特性和应用的参考文献请联系我们。  

T4 RNA 连接酶 2,截短型 KQ 货 号 #M0373L-NEB酶试剂 New England Biolabs

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T4 RNA 连接酶 2,截短型 KQ                              收藏

T4 RNA 连接酶 2,截短型 KQ               货   号                  #M0373L T4 RNA 连接酶 2,截短型 KQ               货   号                  #M0373L T4 RNA 连接酶 2,截短型 KQ               货   号                  #M0373L

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#M0373L
10,000 units
3,219.00

#M0373S
2,000 units
799.00

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相关产品

通用 miRNA 克隆接头
 

特性

 将预腺苷化的 DNA 或 RNA 序列标签连接到任何 RNA 3´ 末端
 将腺苷化单链引物连接至小 RNA 上,用于 cDNA 文库构建
 将腺苷化单链引物连接至 RNA 上,用于链特异性 cDNA 文库构建  

概述

 
 T4 RNA 连接酶 2,截短型 KQT4 Rnl2tr KQ能特异性将 末端预腺苷化的 DNA RNA 连接到RNA 3´ OH 末端。反应无需 ATP,但需预腺苷化接头。

T4 Rnl2tr KQ T4 RNA 连接酶 2,截短型(NEB#M0242)的双点突变体。 K227 的突变降低了赖氨酰腺苷化。由于降低了 T4 Rnl2tr 从接头将腺苷基团转移到 RNA 5´ 磷酸基的活性, K227Q 可以减少 T4 Rnl2tr 非特异性的连接(串联体和环)。在 T4 Rnl2tr K227Q 中进一步突变 R55K,提高了酶的连接活性,使其与野生型 T4 Rnl2tr 连接活性水平一致。
因为不再使用
ATP,而改用预腺苷化接头,同时降低赖氨酰腺苷化酶的活性,所以连接反应的背景可以降至最低。该酶已用于二代测序 Small RNA的文库构建中,优化了接头的连接过程。

 

来源

重组 E. coli 菌株,携带有 MBP 融合表达的质粒,该质粒克隆有含编码 T4 RNA 连接酶 2 的前249 个氨基酸序列。 T4 Rnl2tr K227Q 是将 227 位的赖氨酸突变为谷氨酸。 T4 Rnl2tr KQ 分别在 55 位置进行了突变,精氨酸突变为赖氨酸、赖氨酸突变为谷氨酰胺。

 

 

反应条件

1X T4 RNA 连接酶反应缓冲液[50 mM Tris-HCl (pH 7.5 @ 25℃),10 mM MgCl2,1 mM DTT],25℃ 温育。
热失活:65℃ 20 分钟。  

随酶提供的试剂

10X T4 RNA 连接酶反应缓冲液
50% PEG 8000  

质保声明

无单链和双链 DNA 核酸内切酶、外切酶、 RNase 以及磷酸酶的污染。

 

单位定义

200 单位指 10 μl 反应体系中,25℃ 条件下,1 小时能将 80% 的 31-mer RNA 连接到预腺苷化 17-mer DNA 末端 [miRNA 通用克隆接头(NEB #S1315)] 所需的酶量。单位活性检测条件请登陆 www.neb-china.com 或   

浓度

200,000 units/ml。  

参考文献

有关该产品特性和应用的参考文献请联系我们。   

SplintR® 连接酶 货 号 #M0375L-NEB酶试剂 New England Biolabs

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SplintR® 连接酶                              收藏

SplintR®  连接酶               货   号                  #M0375L SplintR®  连接酶               货   号                  #M0375L SplintR®  连接酶               货   号                  #M0375L

货 号
规 格
价 格(元)
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广州库存
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#M0375L
6,250 units
5,379.00

#M0375S
1,250 units
1,199.00

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特性

 连接被互补 RNA 固定的相邻的单链 DNA
 鉴定 miRNAs 和 mRNAs,包括 SNPs  

概述

SplintR 连接酶也称为 PBCV-1 DNA 连接酶或 Chorella 病毒 DNA 连接酶,它能够高效催化相邻的 DNA 核苷酸的连接,这个连接过程需要一条互补的 RNA 在两条 DNA 单链间起“夹板”或“桥梁”的固定作用。这种以前没有报道过的活性可能推动一些创新性 miRNAs 和 mRNAs,包括 SNPs 的分析方法。在二代测序和分子诊断等众多领域中,SplintR 是富集目的基因的理想选择。它具有稳定的生物活性,对 RNA 介导固定的 DNA 底物亲和性强(米氏常数 Km = 1 nM),能够在复杂的混合物中检测到亚纳摩尔级的特定 RNA。因此,在 RNA 检测技术中,SplintR 连接酶不失为最佳选择用酶。  

来源

来自重组的 E. coli 菌株,其携带编码 PBCV-1 DNA 连接酶的基因。 

反应条件

1X SplintR 连接酶反应缓冲液,25℃ 温育,最佳连接温度是 16℃。热失活:65℃ 温育 20分钟。  

质保声明

SplintR 连接酶经过严格的质控检测,确保该产品具有最高的活性和纯度。详情请登陆 www.neb.com 或 www.neb-china.com。  

单位定义(粘性末端活性单位)

1 单位指 20 μl 反应体系中,1X SplintR 连接酶反应缓冲液,16℃ 条件下,15 分钟内能使 2 pmol(完成 50%)三重 FAM 标记的 DNA:RNA 杂交底物连接所需的酶量。单位活性检测条件请登陆 www.neb.com 或 www.neb-china.com。  

浓度

25,000 units/ml。 

参考文献

关于该酶特性和产品应用的参考文献,请登陆 www.neb.com 或 www.neb-china.com。  

T4 RNA 连接酶 1(ssRNA 连接酶)(高浓度) 货 号 #M0437M-NEB酶试剂 New England Biolabs

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T4 RNA 连接酶 1(ssRNA 连接酶)(高浓度)                              收藏

T4 RNA 连接酶 1(ssRNA 连接酶)(高浓度)                货   号                  #M0437M T4 RNA 连接酶 1(ssRNA 连接酶)(高浓度)                货   号                  #M0437M T4 RNA 连接酶 1(ssRNA 连接酶)(高浓度)                货   号                  #M0437M T4 RNA 连接酶 1(ssRNA 连接酶)(高浓度)                货   号                  #M0437M

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苏州库存

#M0437M
5,000 units
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相关产品

5´ -三磷酸腺苷(ATP)
 

 通用 miRNA 克隆接头

特性

 连接单链 RNA 和 DNA
 用 5´ -[32P] pCp 进行 RNA 3´ 末端标记
 RNA 和 DNA 分子内及分子间的连接
 合成单链寡脱氧核苷酸
 蛋白质中掺入非天然氨基酸  

概述

催化 3´ →5´ 磷酸二酯键的形成,使核苷酸的 5´ -磷酸末端和 3´ -羟基末端连接,伴随着 ATP 水解为 AMP 和 PPi。作用底物包括单链 RNA、DNA 及二核苷焦磷酸。  

来源

携带 T4 RNA 连接酶 1 基因的 E. coli 菌株。  

反应条件

1X T4 RNA 连接酶反应缓冲液[50 mM Tris-HCl (pH 7.5 @ 25℃),10 mM MgCl2,1 mM DTT],加入 1 mM ATP,37℃ 温育。热失活:65℃ 15 分钟或煮沸 2 分钟。  

使用注意事项

pCp 的连接需要加入终浓度为10%(v/v)的 DMSO。  

随酶提供试剂

10X T4 RNA 连接酶反应缓冲液
10 mM ATP(NEB #M0204中包含)或 100 mM ATP(NEB #M0437中包含)50% PEG 8000  

质保声明

无单链 DNA 核酸外切酶、核酸内切酶、RNase 和磷酸酶污染。  

单位定义

1 单位指 37℃ 条件下,30 分钟内将 1 nmol 的 5´ -[32P] rA16 转化成磷酸盐不溶物所需要的酶量。单位活性检测条件请登陆 www.neb-china.com 或   

浓度

10,000 或 30,000 units/ml。  

参考文献

有关该产品特性和应用的参考文献请联系我们。   

RtcB 连接酶 货 号 #M0458S-NEB酶试剂 New England Biolabs

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产品资料 – RNA 试剂 – RNA 连接酶和修饰酶

RtcB 连接酶                              收藏

RtcB 连接酶                货   号                  #M0458S RtcB 连接酶                货   号                  #M0458S RtcB 连接酶                货   号                  #M0458S RtcB 连接酶                货   号                  #M0458S

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特性

    连接单链 RNA 或单链 DNA 3´ –酸基团或 2´ ,3´ –环磷酸基团连接到单链 RNA 5´ –羟基上

含有匹配末端的单链 RNA 环化

 

 

概述

来源于 E. coli RtcB 连接酶能将单链线性RNA 分子中的 3´ –磷酸基或 2´ , 3´ –环磷酸基团与另一个 RNA 分子的 5´ –羟基进行连接。连接反应需有 GTP MnCl2 的参与,并在反应过程中会形成反应中间体鸟苷酸。如底物末端含有 2´ , 3´ –环磷酸基团,需先行水解成 3´ –磷酸基,然后再通过 GMP 进行 末端活化和连接。

 

来源

重组 E. coli 菌株,携带有 His 标签的 RtcB 连接酶基因。

 

反应条件

1X RtcB 反应缓冲液 [50 mM Tris-HCl (pH8.3 @ 2), 75 mM KCl, 3 mM MgCl2, 10 mM DTT],补加0.1 mM GTP 1 mM MnCl237℃ 温育。

 

 

质保声明

无单链和双链 DNA 核酸内切酶、外切酶、 RNase 以及磷酸酶的污染。

 

浓度

15 μM  

参考文献

 有关该产品特性和应用的参考文献请联系我们。 www.neb-china.com www.neb.com  

miRNA 通用克隆接头 货 号 #S1315S-NEB酶试剂 New England Biolabs

上海金畔生物科技有限公司代理New England Biolabs(NEB)酶试剂全线产品,欢迎访问官网了解更多产品信息和订购。

产品资料 – RNA 试剂 – RNA Marker 和 Ladder

miRNA 通用克隆接头                              收藏

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#S1315S
0 83 nmol
2,239.00

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相关产品

 

T4 RNA 连接酶 2,截短型 KQ

 

概述

5zz端腺苷化、3´ 端封闭的寡核糖核苷酸可用于 Bartel 方法中短片段 RNA 分子的克隆(1)。RNA 连接酶可以识别“活化”的腺苷化寡核糖核苷酸,无需 ATP,即可将其 5´ 端与第二条单链 RNA 的 3´ 端 OH 共价连接。利用此 5´ 端腺苷化、3´ 端封闭的寡核糖核苷酸,加入 T4 RNA 连接酶 2,截短型、T4 RNA 连接酶 2,截短型 K227Q 或 T4 RNA 连接酶 1(有/无 ATP),只能与核酸混合物中的目的寡核苷酸连接。

腺苷化的 DNA 寡核苷酸序列是:
5´ -rAppCTGTAGGCACCATCAAT-NH2 3´ 。

参考文献

(1) Lau et al. (2001) Science, 294, 858–856. 

T4 DNA 连接酶缓冲液(10X) 货 号 #B0202SNEB酶试剂 New England Biolabs

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T4 DNA 连接酶缓冲液(10X)                              收藏

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#B0202S
5 ml
359.00

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Prpduct Information

 T4 DNA 连接酶缓冲液(10X)            货   号                  #B0202S

Properties and Usages

 T4 DNA 连接酶缓冲液(10X)            货   号                  #B0202S

StickTogether™ DNA 连接酶缓冲液 货 号 #B0535SNEB酶试剂 New England Biolabs

上海金畔生物科技有限公司代理New England Biolabs(NEB)酶试剂全线产品,欢迎访问官网了解更多产品信息和订购。

产品资料 – Buffers – Buffers

StickTogether™ DNA 连接酶缓冲液                              收藏

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#B0535S
2ml
619.00

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特性

·StickTogether™ 缓冲液随 T3(NEB#M0317)、T7(NEB#M0318)、Hi-T4™(NEB#M2622)和 Salt-                   T4™(NEB#M0467)DNA 连接酶提供

·这些 DNA 连接酶在 1X 缓冲液浓度下活性最佳
·提供 2X 储存浓度缓冲液
·包装内分装为两管
 

储存温度

 -20

1X Buffer 组分

 66 mM Tris-HCl

10 mM MgCl2
1 mM ATP
1 mM DTT
7.5% Polyethylene glycol(PEG 6000)
pH 7.6@25°C