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wako磷酸化蛋白电泳试剂- Phos-tag (TM) Acrylamide

发表于由

磷酸化蛋白电泳试剂——wako Phos-tag (TM) Acrylamide

什么是Phos-tag™

Phos-tag ™ 是一种能与磷酸离子特异性结合的功能性分子，结合特异性与氨基酸的种类和序列无关，无放射性，无需特意制备磷酸化抗体。它可用于磷酸化蛋白的分离（Phos-tag™ Acrylamide）、Western Blot 检测（Phos-tag ™ Biotin）、蛋白纯化 （Phos-tag ™ Agarose）及质谱分析MALDI-TOF/MS （Phos-tag ™ Mass Analytical Kit） 。

Phos-tag的基本结构：

 

 

 

 

 

 

1. Phos-tag™ Acrylamide

Phos-tag™ Acrylamide SDS-PAGE可根据迁移率不同，区分磷酸化蛋白与非磷酸化蛋白。该方法只需在常规的SDS-PAGE胶中添加Phos-tag™ Acrylamide和MnCl2即可进行实验（制胶过程中添加，如需详细说明请联系我们）。

特点
# 非放射性元素，非荧光物质
# 磷酸化蛋白亚型可以在同一电泳道分离出多条带
# 操作简便，与常规SDS-PAGE蛋白电泳相似
# Phos-tag™ 的结合特异性与氨基酸种类、序列无关
# Phos-tag™ SDS-PAGE实验后，可进行常规的免疫组化、质谱等
# 性质稳定，溶于蒸馏水后可以稳定保存至少3个月
# 磷酸化和非磷酸化蛋白可以同时被分离检测
# 不同位点磷酸化修饰以及磷酸化程度不同的蛋白在同一泳道中因迁移率不同而被分离开来

原理

应用

1、黄色粘性油状物质；

2、在4度可保存至少一年；

3、Phos-tagTM与丙烯酰胺（Acrylamide，SDS-PAGE分离胶主要成分)结合分离磷酸化和非磷酸化蛋白。

SDS-PAGE分离胶制备中添加金属离子（Zn2+或者Mn2+）和Phos-tagTM Acrylamide。

在蛋白电泳过程中，磷酸化基团与金属离子螯合的Phos-tagTM Acrylamide发生特异性结合，导致磷酸化蛋白的迁移速度变慢。

Phos-tag® Acrylamide可根据迁移率不同，区分磷酸化蛋白与非磷酸化蛋白。无放射性、非化学物质标记。不同位点磷酸化修饰的蛋白在同一泳道中因迁移率不同而被分离开来。

操作过程与普通SDS-PAGE相类似。Phos-tagTM的特异性结合与氨基酸种类、序列无关。

适用于免疫印迹、质谱分析等后续工作。可识别磷酸化和非磷酸化蛋白。

Phos-tagTM母液可稳定保存至少3个月。

可检测出具有不同磷酸基团数目的蛋白。无需特意制备磷酸化抗体。

产品编号 产品名称 规格 原价
304-93526 Phos-tag™ Acrylamide AAL-107 5mM Aqueous Solution 0.3ml 2670
300-93523 Phos-tag™ Acrylamide AAL-107 2mg 4450
304-93521 Phos-tag™ Acrylamide AAL-107 10mg 10680

Phos-tag Acrylamide (AAL-107)     Wako Cat. #304-93521 (10 mg)]⇒ Protocol(点击进入下载)


Phos-tag Acrylamide (AAL-107)   Wako Cat. #300-93523 (2 mg)]⇒ Protocol(点击进入下载)

 

 

References  参考文献：

    1. “Recognition of phosphate monoester dianion by an alkoxide-bridged dinuclear zinc (II) complex”, E. Kinoshita, M. Takahashi, H. Takeda, M. Shiro, and T. Koike, Dalton Trans., 21, 1189-1193 (2004).

 

    1. “Phosphate-binding tag, a new tool to visualize phosphorylated proteins”, E. Kinoshita, E. Kinoshita-Kikuta, K. Takiyama, and T. Koike, Mol. Cell.
      Proteomics      , 5, 749-757 (2006).

 

    1. “A single nucleotide polymorphism genotyping method using phosphate-affinity polyacrylamide gel electrophoresis”, E. Kinoshita, E. Kinoshita-Kikuta, and T. Koike, Anal. Biochem., 361, 294-298 (2007).

 

    1. “Label-free kinase profiling using phosphate affinity polyacrylamide gel electrophoresis”, E. Kinoshita-Kikuta, Y. Aoki, E. Kinoshita, and T. Koike, Mol. Cell. Proteomics, 6, 356-366 (2007).

 

    1. “Separation of a phosphorylated-His protein using phosphate-affinity Polyacrylamide gel”, S. Yamada, H. Nalkamura, E. Kinoshita, E. Kinoshita-Kikuta, T. Koike, and Y. Shiro, Anal. Biochem., 360, 160-162 (2007).

 

    1. “A mobility-shift detection method for DNA methylation analysis using phosphate-affinity polyacrylamide gel electrophoresis”, E. Kinoshita-Kikuta, E. Kinoshita, and T. Koike, Anal. Biochem., 378, 102-104 (2008).

 

    1. “Separation of phosphoprotein isotypes having the same number of phosphate groups using phosphate-affinity SDS-PAGE”, E. Kinoshita, E. Kinoshita-Kikuta, M. Matsubara, S. Yamada, H. Nakamura, Y. Shiro, Y. Aoki, K. Okita, and T. Koike, Proteomics, 8, 2994-3003 (2008).

 

    1. “FANCI phosphorylation functions as a molecular switch to turn on the Fanconi anemia pathway”, M. Ishiai, H. Kitao, A. Smogorzewska, J. Tomida, A. Kinomura, E. Uchida, A. Saberi, E. Kinoshita, E. Kinoshita-Kikuta, T. Koike, S. Tashiro, S. J. Elledge, and M. Takata, Nature Struct. Mol. Biol., 15, 1138-1146 (2008).

 

    1. “Two-dimensional phosphate affinity gel electrophoresis for the analysis of phosphoprotein isotypes”, E. Kinoshita, E. Kinoshita-Kikuta, M. Matsubara, Y. Aoki, S. Ohie, Y. Mouri, and T. Koike, Electrophoresis, 30, 550-559 (2009).

 

    1. “Phosphate-affinity Gel Electrophoresis Using a Phos-tag Molecule for Phosphoproteome Study”, E. Kinoshita, E. Kinoshita-Kikuta, and T. Koike, Current Proteomics, 6, 104-121 (2009).

 

    1. “Mobility shift detection of phosphorylation on large proteins using a Phos-tag SDS-PAGE gel strengthened with agarose”, E. Kinoshita, E. Kinoshita-Kikuta, H. Ujihara, and T. Koike, Proteomics, 9, 4098-101 (2009).

 

  1. “Separation and detection of large phosphoproteins by using Phos-tag SDS-PAGE”, E. Kinoshita, E. Kinoshita-Kikuta, and T. Koike, Nature Protocols, 4, 1513-21 (2009).

Phos-tag™ 系列磷酸化蛋白新方法

发表于由

Phos-tag™ 系列磷酸化蛋白新方法

英  文  名： Phos-tag™ Acrylamide AAL-107 5mM Aqueous Solution

产　　地： 日本

商　　家： Wako（和光纯药工业株式会社）

wao Phos-tag™实验设计

◆  研究领域

磷酸化蛋白和磷酸化多肽的研究

◆  Phos-tagTM 的简介

Phos-tagTM（Phosphate-binding tag）是由日本广岛大学的Kinoshita等研制的磷酸化蛋白蛋白捕获分子。Phos-tagTM 螯合Zn2+或者Mn2+等重金属离子后形成一个半封闭的空间。在pH值6~8的中性条件下，该空间恰好能容纳一个磷酸基团，使得螯合有金属离子的Phos-tagTM 分子能够与磷酸基团牢固而稳定的结合。可以特异性结合所有氨基酸的磷酸化基团，广泛运用于细菌，酵母，昆虫等物种研究。

◆  Phos-tagTM 系列产品

利用螯合有金属离子的Phos-tagTM 可以特异性结合磷酸化基团的特点，研发了Phos-tagTM 系列产品，运用于常见的蛋白实验，比如SDS-PAGE，免疫印迹，亲和层析，质谱等。

Phos-tagTM 系列产品 产品描述 用途 具体运用实验
Phos-tagTM   Acrylamide Phos-tagTM 与丙烯酰胺（Acrylamide，SDS-PAGE分离胶主要成分)结合 分离磷酸化和非磷酸化蛋白。SDS-PAGE分离胶制备中添加金属离子（Zn2+或者Mn2+）和Phos-tagTM Acrylamide。在蛋白电泳过程中，磷酸化基团与金属离子螯合的Phos-tagTM Acrylamide发生特异性结合，导致磷酸化蛋白的迁移速度变慢。 SDS-PAGE（单一蛋白）

免疫印迹（多种蛋白混合液，例如细胞裂解液，组织均浆液，体外激酶反应体系。使用目的蛋白的非磷酸化抗体作为一抗）
Phos-tagTM Biotin Phos-tagTM 与生物素（Biotin）结合 可与亲和素标记的HRP结合，检测磷酸化蛋白。 免疫印迹（正常SDS-PAGE）
Phos-tagTM  Agarose Phos-tagTM 与琼脂糖（Agarose）结合 利用磷酸化基团与金属离子螯合的Phos-tagTM Agarose特异性结合，纯化磷酸化蛋白。 亲和层析法
Phos-tagTM Mass Analytical kit Phos-tagTM 与不同荷质比的Zn结合 检测微量磷酸化蛋白和磷酸化多肽。 质谱实验

备注：除Phos-tagTM Mass Analytical kit之外，其他Phos-tagTM 系列产品都需要配置金属离子溶液。

Phos-tag™ 系列磷酸化蛋白新方法！
Phos-tag™ 是一种能与磷酸离子特异性结合的功能性分子。它可用于磷酸化蛋白的分离（Phos-tag™ Acrylamide）、Western Blot检测（Phos-tag™ Biotin）、蛋白纯化 （Phos-tag™ Agarose）及质谱分析MALDI-TOF/MS （Phos-tag™ Mass Analytical Kit）。

◆Phos-tag™ 的基本结构

◆特点
与-2价磷酸根离子的亲和性和选择性高于其它阴离子
在pH 5-8的生理环境下生成稳定的复合物

◆原理

◆应用

样品类型: 纯化蛋白、组织均浆液、组织裂解液、体外酶反应液
样品来源物种: 无物种特异性，可用于人、植物（拟南芥 水稻 棉花等）、动物（斑马鱼 灵长类等）、微生物(酵母 细菌 真菌等） 昆虫（果蝇 蚕等）
分离蛋白大小: 磷酸化蛋白的分离范围在十几到220kDa，文献报道可分离350kDa的磷酸化蛋白
准备的试剂和仪器: 10mM的MnCl2溶液，固体产品需要溶解于甲醇中,其余与常规SDS-PAGE相同
各包装可做实验次数: 2mg包装20μM可制约20块胶，50μM约8块；10mg包装20μM可制100块胶，50μM约40块
凝胶染色: 考马斯亮蓝、银染、荧光染色、阴性染色

◆相关产品

产品名称 用　　途
　Phos-tag™ Acrylamide 　分离: SDS – PAGE 分离不同磷酸化水平的蛋白
　SuperSep Phos-tag™ 　分离: 预制胶中含有50μM Phos-tag™ Acrylamide
　Phos-tag™ Biotin 　检测: 代替 Western Blot 检测中的磷酸化抗体
　Phos-tag™ Agarose 　纯化: 通用柱层析，纯化磷酸化蛋白
　Phos-tag™ Mass
Analytical Kit		 　分析: 用于质谱 MALDI-TOF/MS 分析，提高磷酸化分子的检测灵敏度

 

Phos-tag Acrylamide（丙烯酰胺）

产品编号 生产商编号 产品名称 规格 Phos-tag在配制胶中的浓度
20μM 50μM 100μM
304-93526 AAL-107S1 Phos-tag™ Acrylamide AAL-107 5mM Aqueous Solution 0.3mL 约10块 约4块 约2块
300-93523 AAL-107M Phos-tag™ Acrylamide AAL-107 2mg 约20块 约8块 约4块
304-93521 AAL-107 Phos-tag™ Acrylamide AAL-107 10mg 约100块 约40块 约20块

 

SuperSep Phos-tag™ （丙烯酰胺预制胶）

产品编号 产品名称 产品规格
193-16711 SuperSep Phos-tag™ (50 μmol/L), 10%, 13 well
Phos-tag 13孔10%预制胶		 5块
190-16721 SuperSep Phos-tag™ (50 μmol/L), 10%, 17 well
Phos-tag 17孔10%预制胶		 5块
195-16391 SuperSep Phos-tag™ (50 μmol/L), 12.5%, 13 well
Phos-tag 13孔12.5%预制胶		 5块
193-16571 SuperSep Phos-tag™ (50 μmol/L), 12.5%, 17 well
Phos-tag 17孔12.5%预制胶		 5块
193-16691 SuperSep Phos-tag™ (50 μmol/L), 15%, 13 well
Phos-tag 13孔15%预制胶		 5块
196-16701 SuperSep Phos-tag™ (50 μmol/L), 15%, 17 well
Phos-tag 17孔15%预制胶		 5块
197-16851 SuperSep Phos-tag™ (50 μmol/L), 17.5%, 13 well
Phos-tag 13孔17.5%预制胶		 5块
194-16861 SuperSep Phos-tag™ (50 μmol/L), 17.5%, 17 well
Phos-tag 17孔17.5%预制胶		 5块
198-17981 SuperSep™ Phos-tag™ (50μmol/l), 7.5%, 17well, 83×100×3.9mm
Phos-tag™ 预制胶，BioRad型		 5块
195-17991 SuperSep™ Phos-tag™ (50μmol/l), 12.5%, 17well, 83×100×3.9mm
Phos-tag™ 预制胶，BioRad型		 5块
192-18001 SuperSep™ Phos-tag™ (50μmol/l), 7.5%, 17well, 100×100×6.6mm
Phos-tag™ 预制胶，Life Technologies型		 5块
199-18011 SuperSep™ Phos-tag™ (50μmol/l), 12.5%, 17well, 100×100×6.6mm
Phos-tag™ 预制胶，Life Technologies型		 5块

Phos-tag™ Biotin（生物素）

产品编号 生产商编号 产品名称 规格
301-93531 BTL-104 Phos-tag™ Biotin BTL-104 10mg
308-97201 BTL-111S1 Phos-tag Biotin BTL-111 1mM Aqueous Solution 0.1ml

Phos-tag™ Agarose（琼脂糖）

产品编号 生产商编号 产品名称 规格
302-93561 AG-501 Phos-tag™ Agarose 0.5ml
308-93563 AG-503 Phos-tag™ Agarose 3ml

Phos-tag™ Mass Analytical Kit（质谱分析试剂盒）

产品编号 生产商编号 产品名称 规格
305-93551 MS-101KIT Phos-tag™ Mass Analytical Kit 1 set

SuperSep Phos-tag™ 预制胶即开即用！
phos-tag™ 由日本广岛大学研究生院医齿药学综合研究科医药分子功能科学研究室开发。
SuperSep Phos-tag™ 是一种预制胶，预先加入了50 μmol/L的Phos-tag™ Acrylamide，打开包装即可直接使用。预制胶中含有锌作为金属离子，在中性凝胶缓冲液中保存稳定性很好，得到的结果条带也很整齐。

 板大小  100 x 100 x 3 (mm)
 凝胶大小  90 x 85 x 1 (mm)
 孔数  13  17
 孔容积  30 μL  25 μL
 Phos-tag™浓度  50 μmol/L
 丙烯酰胺浓度  10%、12.5%、15% 和17%
 ZnCl2浓度  100 μmol/L

 

◆优点、特色
·即开即用
·预制胶使用安全
·可长期保存（6个月）
·操作与普通SDS-PAGE一样

◆案例、应用
电泳条件：30 mA（恒电流）, 60分钟
样品：5 ug/Lane α-酪蛋白（含磷酸化与去磷酸化α-酪蛋白）（产品编号038-23221）
普通SDS-PAGE只观察到一条条带，而Phos-tag™ SDS-PAGE里可见α-酪蛋白磷酸化和α-酪蛋白去磷酸化两条
条带。
样品缓冲液：Sample Buffer Solution (2ME+) (X4) (产品编号191-13272)
电泳缓冲液：SDS-PAGE 缓冲液, pH8.5(产品编号192-16801)
染色：QUICK CBB PLUS(产品编号174-00553)
P10%(左) : SuperSep Phos-tag™ (50 μmol/L), 10%, 13well
P15%(中) : SuperSep Phos-tag™ (50 μmol/L), 15%, 13well
A15%(右) : SuperSep™Ace, 15%, 13well （不含Phos-tag™）

◆相关产品

产品编号 产品名称 规　　格
 058-07681  EasySeparator <配套电泳槽>  1 套
 230-02461  Wide-View Prestained Protein Size Marker III (11~245kDa)  500 μL (200 次)
 038-23221  α-Casein, from Bovine Milk, Dephosphorylated  1 mg

◆具体实例

1. 体外激酶反应，激酶和底物都带有标签，反应后亲和层析法纯化获得激酶和底物，如何检测底物的磷酸化情况？

如果底物和激酶分子量差别大，通过正常的SDS-PAGE能够区分，建议使用Phos-tagTM Biotin。将激酶和底物进行免疫印迹实验，用Phos-tagTM Biotin作为抗体检测底物的磷酸化基团（需记录底物的条带位置）。可通过剥离（strip）方式剥离Phos-tagTM Biotin，用底物的非磷酸化抗体进一步验证其位置。

如果底物和激酶分子量差别不大，可进行Mn2+-Phos-tagTM SDS-PAGE实验,然后转膜，用底物的非磷酸化抗体检测（没有使用激酶的抗体，所以检测不到激酶的带）。在Mn2+-Phos-tagTM SDS-PAGE中磷酸化和非磷酸化底物发生分离，用底物的非磷酸化抗体可以检测所有底物。免疫印迹实验后，观察所有的条带，非磷酸化底物由于没有和Mn2+-Phos-tagTM Acrylamide结合，所以迁移速度较快，磷酸化底物则迁移速度变慢。通过迁移率的变化，分析磷酸化底物的含量。

备注：

1） Mn2+-Phos-tagTM SDS-PAGE实验中，建议使用α-Casein, from Bovine Milk, Dephosphorylated（038-

       23221），该产品中含有磷酸化和非磷酸化的α-Casein，确保试剂和实验条件能够分离磷酸化蛋白。

2）如果没有非磷酸化底物，可使用Alkaline Phosphatase(for Biochemistry)（018-10693）对底物进行去磷酸

     化反应。

2. 如何检测EGF（表皮生长因子）刺激后细胞内MAPK的磷酸化水平？

收集EGF刺激的细胞，制备细胞裂解液作为样品。进行正常的SDS-PAGE实验和Mn2+-Phos-tagTM SDS-PAGE实验，转膜后用MAPK的非磷酸化抗体作为一抗进行检测（检测所有的MAPK，包括磷酸化和非磷酸化）。正常SDS-PAGE实验中，磷酸化的MAPK和非磷酸化MAPK没有分离，而在Mn2+-Phos-tagTM SDS-PAGE实验中磷酸化MAPK和非磷酸胡MAPK发生分离，所以转膜后，用MAPK抗体检测，可以看到分离的条带。比较正常的SDS-PAGE用MAPK抗体的免疫印迹实验和Mn2+-Phos-tagTM SDS-PAGE用MAOK抗体的免疫印迹实验，多出来的条带就是磷酸化的MAPK。

备注：该实验的前提是EGF刺激后细胞内的MAPK发生磷酸化，细胞内包含磷酸化和非磷酸化的MAPK。如果刺激后细

          胞内不含有磷酸化的MAPK，则无法用Phos-tagTM Acrylamide分离磷酸化和非磷酸化MAPK。

3. 研究蛋白相互作用的实验中，构建带有不同标签的2种融合蛋白，共转染细胞，在细胞内发生磷酸化反应。通过不同标

    签的亲和层析柱获得纯化的蛋白，是否可用Phos-tagTM Agarose纯化，进行后续免疫共沉淀实验（Co-IP）实验？

Phos-tagTM Agarose纯化磷酸化蛋白，采用高盐的洗脱方式，没有使用界面活性剂、还原剂、酸或者碱洗脱，蛋白不发生变性，可进行后续的Co-IP实验。

4. 检测的样品中含有两种磷酸化的蛋白，分子量很接近，如何使用Phos-tagTM 产品检测磷酸化？

如果样品中两种磷酸化蛋白的分子量很接近，通过正常的SDS-PAGE实验无法区分，建议使用Phos-tagTMAcrylamide。进行Mn2+-Phos-tagTM SDS-PAGE实验后用两种蛋白的非磷酸化抗体进行检测。

也可以使用Phos-tagTM Biotin。进行正常SDS-PAGE实验后，先用两种蛋白的非磷酸化抗体进行检测，剥离（strip）后用Phos-tagTM Biotin。如果磷酸化蛋白量少的　话，剥离（strip）会去除一些蛋白，可能会影响检测的效果。

5. 使用Phos-tagTM Mass Analytical kit，样品中如果含有磷酸缓冲液是否有影响？

该试剂盒检测磷酸化蛋白和多肽的灵敏度较高，样品中含有的磷酸缓冲液会影响磷酸化蛋白与Phos-tagTM 结合。

wako LabAssay系列试剂盒–游离脂肪酸定量检测试剂盒

发表于由

wako LabAssay系列试剂盒–游离脂肪酸定量检测试剂盒

WAKO LabAssay系列试剂盒
编号 名称 包装
6390192  LabAssay™ A/G（白蛋白与球蛋白比值检测试剂盒） 1000次
6590190  LabAssay™ Creatinine（肌氨酸酐定量检测试剂盒） 500次
6570198  LabAssay™ Glucose（葡萄糖定量检测试剂盒） 1000次
6360194  LabAssay™ NEFA（游离脂肪酸定量检测试剂盒） 750次
6380196  LabAssay™ Phospholipid（磷脂定量检测试剂盒） 1300次
6370190  LabAssay™ Triglyceride（甘油三酯定量检测试剂盒） 1000次
5860191  LabAssay™ ALP（碱性磷酸酶定量检测试剂盒） 900次
6580194 LabAssay™ Cholestero（胆固醇定量检测试剂盒） 1000次
6400192 LabAssay™ Uric Acid（尿酸定量检测试剂盒） 1300次
可用于人，大鼠以及小鼠血清样本的检测
（ 以上试剂盒仅为研究试剂，不可用于诊断或做其他用途。）

LabAssay™ NEFA 游离脂肪酸定量检测试剂盒
【摘要】
游离脂肪酸(NEFA)是脂肪细胞中的中性脂肪被分解后由血中被释放出来的物质，在血清中与白蛋白结合，被末梢组织搬运，成为末梢组织重要的能源来源。
检测游离脂肪酸的量，可用于调节由脂肪组织释放到肝脏的物质，有利于掌握类脂化合物代谢的动态。
【检测原理】
样品中的游离脂肪酸(NEFA)在辅酶A与(CoA)腺嘌呤核苷-5′-三磷酸二钠(ATP)的存在下，受酰基-CoA合成酶(ACS)作用，生成酰基-CoA、AMP及焦磷酸(PPi)。生成的酰基-CoA在酰基-CoA氧化酶(ACOD)的作用下被氧化，同时生成2,3-反式-烯酰-CoA及过氧化氢。生成的过氧化氢在过氧化物酶(POD)的作用下，与3-甲基-N-乙基-N- (β-羟乙基甲基)-苯胺(MEHA)及4-氨基安替比林发生定量性氧化缩合，生成青紫色色素。测量这个青紫色色素吸光值，即可计算出样品中的NEFA浓度。
【特点】
?以实验动物为对象的生物化学检测试剂
?用微孔板检测，可用少量样品一次检测多个样品

LabAssay TM NEFA [ACS?ACOD法]
在血中游离脂肪酸(NEFA:Non-Esterified Fatty Acid)，与白蛋白结合，被末梢组织搬运，成为末梢组织重要的能源来源。游离脂肪酸的浓度，可用于调节由脂肪组织释放到肝脏的物质，在末梢组织中的消耗。
本品可根据测量氧化缩合生成的青紫色色素的吸光值，检测样品中游离脂肪酸的量。
【特点】
?蒸馏水作为样品时，吸光值在0.07以下。
?检测已知浓度血清样品时，浓度为已知浓度±15%以内。
【检测波长】波长:550nm
【试剂盒组成】
显色剂A…10ml用×6瓶 ,
显色剂A溶解液…65ml×1瓶 ,
显色剂B…20ml用×6瓶,
显色剂B溶解液 …130ml×1瓶,
标准液(油酸 1mEq/l)…10ml×1瓶

【使用方法】
【试剂的配制】
显色试剂A:
1瓶显色剂A(10ml用)溶解于10ml显色剂A溶解液中，得到显色试剂A。
显色试剂B:
1瓶显色剂B(20ml用) 溶解于20ml显色剂B溶解液中，得到显色试剂B。
标准液:
附带的标准液可直接使用，也可经稀释作为标准系列使用。
【标准操作法】
向微孔板内添加4μl样品和80μl显色试剂A，充分混合，在37℃加热10分钟。加入160μl显色试剂B，在37℃加热10分钟。以此作为对照空白值，测量样品及标准液的吸光值。
【检测波长】
550nm (进行双波长检测时，主波长为546nm,副波长为660nm)

LabAssay™ ALP Alkaline Phosphatase Assay Kit 碱性磷酸酶定量检测试剂盒
【摘要】
碱性磷酸酶的活性检测试剂盒。常用于检测培养的成骨细胞、实验动物血清和骨组织中的碱性磷酸酶活性。
碱性磷酸酶(ALP)广泛分布于肝脏、骨、小肠之中。特别在骨代谢研究领域方面被用作为骨形成指标之一。本品是用p–硝基苯磷酸作为底物的碱性磷酸酶检测试剂盒，利用微孔板，可进行多种样品的检测。
【检测原理】
样品在含有p-硝基苯磷酸的碳酸盐缓冲液(pH9.8)中反应，在样品中的碱性磷酸酶作用下，p-硝基苯磷酸分解为p-硝基酚和磷酸。生成的p-硝基酚为碱性，呈黄色。根据测量其405nm的吸光值，计算出样品中碱性磷酸酶的活性。

LabAssay TM ALP  [p-硝基苯磷酸基质法]
【性能】
检测范围：>0.06 mmol/L
标准曲线范围：0～0.5 mmol/L
再现性：C.V.<10%
【试剂盒组成】
底物———————20片（溶解时：p-硝基苯磷酸二钠 6.7mmol/L)
底物溶解液——-100ml×1瓶（2.0mmol/L氯化镁含有0.1mol/L碳酸盐缓冲液pH9.8)
反应终止液——-100ml×1瓶（0.2mol/L氢氧化钠溶液）
标准液—————10ml×1瓶（0.5mmol/L p-硝基酚溶液）
【试剂的配制】
1）底物缓冲液：1片底物溶解于5mL底物溶解液中。
2）反应终止液：直接使用。
3）系列稀释标准液：将标准液用蒸馏水依次稀释为0.5、0.25、0.125、0.0625 mmol/L等2倍率稀释液系列。
【标准操作法】
向96孔微孔板内添加100μl底物缓冲液和20μl样品，在微孔板震荡器上充分振荡1分钟后，37℃孵育15分钟。
添加80μl反应终止液，在微孔板震荡器上充分振荡1分钟后，用酶标仪测量405nm处的吸光值。同样方法进行空白(蒸馏水)对照和标准品的检测。
【活性单位的定义】
在pH9.8，37℃情况下，1分钟内生成1nmol p-硝基酚所需的酶的活性为1个活力单位（U）。
活性（U/μl）= C/15 ×a
C：由标准曲线得到的OD值(A实验值减去A空白值)，计算p-硝基酚浓度(mmol/L=nmol/μl)      15：反应时间(min.)
a：样品的稀释倍数

当样品为成骨细胞时，使用本试剂盒前样本需要预处理
在48孔板上进行细胞培养后，除去培养基，用PBS冲洗感光板，各孔添加150μl 0.05%的曲拉通X，进行冻结→融化→冻结→融化操作。4℃，15,000rpm离心15分钟处理，将上清液移到新的辅助管，以此作为样品。
(注1）48孔板：培养时，一般不采用96孔板，多使用48孔板。
(注2) 曲拉通X的作用：溶解细胞膜，回收蛋白(细胞内含有ALP蛋白)的试剂。
(注3) 反复的冻结融化：原理不明，但这样做似乎可以提高ALP活性。
(注4) 也有不使用曲拉通X，用超声波降解法(超声波处理)对细胞造成物理性休克得到溶解产物的方法。
(注5) 曲拉通X的添加量：以150μL为例，孔中细胞约为20,000cell。

LabAssay™ Cholestero  胆固醇定量检测试剂盒
【摘要】
胆固醇是生物细胞膜的主要成分，是众多动物合成甾族化合物的前体物质。
本品是利用N-乙基-N-(2-羟基-3-磺丙基)-3,5-二甲氧基苯胺钠(DAOS)，通过酶浅蓝色显色反应，检测血清等样品中胆固醇量的试剂盒。与微孔板配套使用，可进行多样品检测。
【检测原理】
样品中的胆固醇酯类在胆固醇酯酶作用下，被分解为游离胆固醇和脂肪酸。在这里生成的游离胆固醇与既存的游离胆固醇类一起被胆固醇氧化酶氧化，产生过氧化氢。生成的过氧化氢，在过氧化物酶作用下，与N-乙基-N-(2-羟基-3-磺丙基)-3,5-二甲氧基苯胺钠(DAOS) 及4-氨基安替比林定量氧化缩合，产生浅蓝色色素。测量这个浅蓝色色素的吸光值，即可计算出样品中的胆固醇浓度。

LabAssay TM胆固醇 [胆固醇氧化酶、DAOS法]
【试剂盒组成】
缓冲液—————————–150ml×2瓶(MES缓冲液)
显色剂———————-150ml用×2瓶
(溶解时：胆固醇酯酶，胆固醇氧化酶，过氧化物酶，DAOS，4-氨基安替比林，抗坏血酸氧化酶)
标准液—————————10ml用×1瓶
【性能】
灵敏度
蒸馏水作为样品时，吸光值在0.11以下。
特定浓度的标准液(200mg/dl) 作为样品时，吸光值为0.13～0.65。
?特异性
可检测1,000mg/dl的总胆固醇浓度。
【检测波长】
主波长：600nm, 副波长：700nm
【试剂的配制】
显色剂：将1瓶显色剂(150mL用)溶解于1瓶缓冲液(150mL)中。
配制后，以2～10℃保存，可保存3星期。
【标准操作法】
向微孔板内添加2μl样品和300μl显色剂，充分混合，在37℃孵育5分钟。以此作为对照空白值，测量样品及标准液的吸光值。

LabAssay™ Uric Acid  尿酸定量检测试剂盒
【摘要】
尿酸是嘌呤衍生物的代谢产物，血清中的尿酸是核蛋白的分解产物和食物性物质，核蛋白代谢异常和肾脏机能障碍与尿酸量的变化存在联系。本品是利用尿酸酶与N-乙基-N-(2-羟基-3-磺丙基)-3,5-甲基苯胺钠(TOOS)，进行酶促反应生成青紫色色素，根据生成物质的吸光值检测血清中、尿中的尿酸量的试剂盒。与微孔板配套使用，可进行多样品检测。
【检测原理】
尿酸酶氧化样品中的尿酸，产生过氧化氢。生成的过氧化氢，在过氧化物酶的作用下，与N-乙基-N-(2-羟基-3-磺丙基)-3,5-甲基苯胺钠(TOOS) 及4-氨基安替比林定量氧化缩合，产生青紫色色素。测量这个青紫色色素的吸光值，计算出样品的尿酸浓度。

LabAssay TM尿酸 [尿酸酶、TOOS法]
与微孔板配套使用，可用于小鼠血清中尿酸的检测。
【特点】
蒸馏水作为样品时，吸光值为0.15以下。
测量已知浓度的血清时，结果在已知浓度的±15％以内。
【试剂盒组成】
缓冲液—————-100ml×4瓶(磷酸缓冲液(pH6.4),TOOS)
显色剂————100ml用×4瓶
(溶解时：尿酸酶，过氧化物酶，4-氨基安替比林，脂蛋白脂肪酶，抗坏血酸氧化酶)
尿酸标准液————10ml×1瓶
【试剂的配制】
显色剂：将1瓶显色剂(100mL用)溶解于1瓶缓冲液(100mL)中。
配制后，2～10℃保存，可保存3星期。
【标准操作法】
向微孔板内添加5μl样品和300μl显色剂，充分混合，37℃孵育5分钟。以此作为空白对照值，测量样品及标准液的吸光值。
【检测波长】
主波长555nm(副波长700nm)
【性能】
蒸馏水测量时的吸光值<0.15。
特定浓度标准液(尿酸10mg/dL)测量时的吸光值为0.04～0.26。

LabAssay™ A/G   白蛋白与球蛋白比值检测试剂盒
【摘要】
白蛋白作为易溶于水的纯蛋白，广泛分布在生物体内。在动物血清中, 白蛋白占总蛋白的大部分，作用是维持渗透压，与难溶于水的物质(脂肪酸和胆红素酸等)结合，负责这些物质的运输。在血清蛋白质中含量仅次于白蛋白的是球蛋白，其作用是负责甾类激素等的运输。白蛋白和球蛋白占血清蛋白的大部分。通常情况下认为白蛋白/球蛋白的比例保持在一定的范围内。不过，在肝脏和肾脏机能发生变化或处于某种疾病状态中，白蛋白/球蛋白的比例会发生变化。
【检测原理】
白蛋白（BCG法)
样品受显色剂作用，样品中的白蛋白与溴甲酚绿(BCG)结合，产生浅蓝色色素。测量这个浅蓝色色素的吸光值，计算样品中白蛋白的浓度。
总蛋白质(双缩脲法)
样品受总蛋白显色剂的作用，样品中的蛋白与铜离子产生紫红色络合物。测量紫红色络合物的吸光值，计算样品中总蛋白浓度。
球蛋白：总蛋白浓度减去白蛋白浓度，即可计算出样品中球蛋白的浓度。白蛋白浓度和球蛋白浓度的比称为白蛋白/球蛋白比(A/G比)。
*当样品是高脂肪血清时，请使用白蛋白修正缓冲液。
*高脂肪血清修正法
1) 在白蛋白测量中，当样品为高浓度乳浊血清时，请根据下列方法测量空白样品值，从样品的吸光值扣除进行修正。 “样品空白值测量法” 1μl血清加上250μl白蛋白修正缓冲液，充分混合后，作为对照品测量水在630nm处的吸光值。
2) 在总蛋白测量中，当样品为高浓度乳浊血清时，请根据下列方法测量空白样品值，从样品的吸光值扣除进行修正。 “样体空白值测量法”5μl血清加上250μl生理食盐水，充分混合后，作为对照品测量水在540nm处的吸光值。

LabAssay TMA/G [BCG法、双缩脲法]
本品是包含总蛋白显色剂（基于双缩脲法）、白蛋白显色剂（基于BCG法）、标准血清的检测试剂盒。可同时检测总蛋白及白蛋白浓度，计算出白蛋白/球蛋白比。
【特点】
〈白蛋白〉
蒸馏水作为样品时，吸光值为0.120～0.220。
测量已知浓度的血清时，结果在已知浓度的±12％以内。
〈总蛋白〉
蒸馏水作为样品时，吸光值为0.050～0.100。
测量已知浓度的血清时，结果在已知浓度的±10%以内。
【试剂盒组成】
白蛋白显色剂————-250ml×1瓶
总蛋白显色剂———- –250ml×1瓶
标准血清———————3ml用×1瓶
白蛋白修正缓冲液——–25ml×1瓶

LabAssay™ Creatinine 肌氨酸酐定量检测试剂盒
【摘要】
肌氨酸酐是肌肉中肌酸与ATP发生反应后所生成的代谢产物。
肌氨酸酐大部分在肾脏循环时被过滤，不再被吸收而被排出体外。肾功能障碍和肌肉中能量代谢变化时，样品中肌氨酸酐的量发生变化。
【检测原理】
向样品中加入除蛋白剂，离心分离，回收上清。上清中加入苦味酸及氢氧化钠溶液，在碱性条件下，肌氨酸酐和苦味酸发生缩合，产生橙红色的缩合物。测量这个橙红色缩合物的吸光值，计算样品中的肌氨酸酐浓度。
上海西宝生物科技有限公司 杨先生 13512172575 13788987962
LabAssay (TM) 肌氨酸酐[Jaffe′法]研究试剂
肌氨酸酐是由存在于肌肉、神经内的磷酸肌酸直接产生，或由肌酸脱水产生，经肾毛细血管球过滤后被排除体外的代谢产物。利用Jaffe法，在碱性条件下，通过检测苦味酸与肌氨酸酐反应生成的橙红色色素检测样品中肌氨酸酐含量。
【特点】
蒸馏水作为样品时，吸光值为0.010～0.020。
使用已知浓度的血清进行检测时，在已知浓度的±10%以内。
【试剂盒组成】
除蛋白剂…150ml×1瓶
苦味酸…50ml×1瓶
0.75mol/L 氢氧化钠溶液…50ml×1瓶
标准液 (肌氨酸酐10mg/dl)…15ml×1瓶
【试剂的制备】
除蛋白剂?苦味酸?0.75mol/L 氢氧化钠溶液:全部都可以直接使用
标准液: 附带的标准液可直接使用，或稀释后作为系列标准液。
【标准操作法】
将300μl除蛋白剂和50μl样品在样品管中混合，室温放置10分钟，离心分离(2,500rpm以上反应10分钟)，回收上清。
向酶标板的孔中加入100μl上清，再加入50μl苦味酸和50μl 0.75mol/L氢氧化钠溶液，在25～30℃反应20分钟。
作为空白对照，检测样品及标准液的吸光值。
【检测波长】 520nm

Wako用于糖尿病、高血脂、肥胖症药理研究的产品

发表于由

Wako用于糖尿病、高血脂、肥胖症药理研究的产品

       在生命科学领域，上海金畔生物为业界提供了丰富的实验室和生物医药生产研发的产品。庆祝上海金畔生物正式成为Wako用于糖尿病、高血脂、肥胖症药理研究的产品

的签约代理商，在这里要感谢广大客户多年来对上海金畔生物科技有限公司的支持和厚爱，我们将一如既往的为广大客户带来Wako用于糖尿病、高血脂、肥胖症药理研究的产品高品质的产品和服务，欢迎广大新老客户来电咨询。

货号

英文名称

中文名称

包装

CAS

产品说明

纯度

022-16091

Bezafibrate

苯扎贝特

5G

41859-67-0

贝特类PPARα激动剂。控制与脂肪合成相关的蛋白质表达，抑制胆固醇，甘油三酯的合成；另外，通过促进脂蛋白的代谢，降低坏胆固醇、甘油三酯，增加良性胆固醇。

97.0+%

028-16093

Bezafibrate

苯扎贝特

100G

41859-67-0

97.0+%

033-21191

Ciprofibrate

环丙贝特

25mg

52214-84-3

贝特类PPARα激动剂。控制与脂肪合成相关的蛋白质表达，抑制坏胆固醇、甘油三酯合成的同时，增加良性胆固醇。

98.0+%（HPLC）

039-21193

Ciprofibrate

环丙贝特

100mg

52214-84-3

98.0+%（HPLC）

039-10603

Clofibrate

氯苯丁酯

25ml

637-07-0

贝特类PPARα激动剂。控制与脂肪合成相关的蛋白质表达、抑制胆固醇、甘油三酯的合成。降低甘油三酯的效果很明显。

98.0+% (Capillary GC)

060-05361

Fenofibrate

菲洛贝特

5G

49562-28-9

贝特类PPARα激动剂。控制与脂肪合成及代谢相关的蛋白质表达，降低胆固醇、甘油三酯的同时，增加良性胆固醇，还降低尿酸。

98.0+% (HPLC)

068-05362

Fenofibrate

菲洛贝特

25G

49562-28-9

98.0+% (HPLC)

066-05363

Fenofibrate

菲洛贝特

100G

49562-28-9

98.0+% (HPLC)

209-18141

Tetradecylthioacetic Acid

十四烷基硫代乙酸

10mg

2921-20-2

不受β氧化的脂肪酸类似物的PPAR激动剂。按照PPARα＞PPARβ＞PPARδ的顺序发生强烈作用。另外，有报告指出，使用此激动剂，根据线粒体膜电位的去极化，会诱发IPC-81白血病细胞的细胞凋亡。

95.0+% (Capillary GC)

205-18143

Tetradecylthioacetic Acid

十四烷基硫代乙酸

100mg

2921-20-2

95.0+% (Capillary GC)

231-02371

WY-14643

匹立尼酸

10mg

50892-23-4

PPARα选择性激动剂。即使与PPARγ、PPARδ相比较，也能体现活性。

/

237-02373

WY-14643

匹立尼酸

50mg

50892-23-4

/

130-13001

MK-886

MK-886

5mg

118414-82-7

PPARα拮抗剂。另外还有FLAP（5-Lipoxygenase Activating Protein）的选择性抑制剂。对FLAP的结合位点有着高亲和性，抑制5-Lipoxygenase的活性化。

98+% (TLC)

030-20981

Ciglitazone

环格列酮

5mg

74772-77-3

噻唑烷二酮类的PPARγ激动剂。改善胰岛素抵抗，降低血糖。

97.0+%(HPLC)

162-24831

Pioglitazone Hydrochloride

盐酸吡格列酮

100mg

112529-15-4

噻唑烷二酮类的PPARγ激动剂。改善胰岛素抵抗，降低血糖。

98.0+% (HPLC)

168-24833

Pioglitazone Hydrochloride

盐酸吡格列酮

500mg

112529-15-4

98.0+% (HPLC)

184-02651

Rosiglitazone

罗格列酮

5mg

122320-73-4

噻唑烷二酮类的PPARγ激动剂。改善胰岛素抵抗，降低血糖。

98.0+% (HPLC)

180-02653

Rosiglitazone

罗格列酮

25mg

122320-73-4

98.0+% (HPLC)

205-17881

TIPP-703

TIPP-703

10mg

/

PPAR pan激动剂。按照PPARγ＞PPARα＞PPARδ的顺序发生强烈的作用。

99.4％（HPLC）[首回生产批次]

075-05611

GW9662

2-氯-5-硝基-N-苯基苯酰胺

5mg

22978-25-2

细胞通透性的不可逆性PPARγ拮抗剂

97.0+% (HPLC)

071-05613

GW9662

2-氯-5-硝基-N-苯基苯酰胺

25mg

22978-25-2

97.0+% (HPLC)

341-90213

3-Deoxyglucosone

3-脱氧葡萄糖醛酮

1mg

/

能定量检测出血浆血清中的3-DG的标准物质，用于AGE生成模型实验

/

138-15481

Metformin Hydrochloride

盐酸二甲双胍

100g

1115-70-4

糖尿病药理研究用

98.0+% (Titration)

130-15485

Metformin Hydrochloride

盐酸二甲双胍

500g

1115-70-4

糖尿病药理研究用

98.0+% (Titration)

050-07261

Exendin-4

重组醋酸艾塞那肽-4

0.5mg

141758-74-9

抑制胰高血糖素的分泌，促进胰岛素分泌的2型糖尿病治疗药物，不易被分解。

90.0+% (HPLC)

056-07241

Exendin (9-39)

重组醋酸艾塞那肽 (9-39)

0.5mg

133514-43-9

GLP-1的受体对抗药

/

057-07271

Exendin-4 (3-39)

重组醋酸艾塞那肽-4 (3-39)

0.5mg

/

强力GLP-1的受体对抗药

/

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25g

10238-21-8

磺脲剂（SU剂）

98.0+% (Titration)

202-15211

Tolazamide

甲磺氮草脲

5g

1156-19-0

磺脲剂（SU剂）

96.0+% (Titration)

200-15212

Tolazamide

甲磺氮草脲

25g

1156-19-0

磺脲剂（SU剂）

96.0+% (Titration)

209-09172

Tolbutamide

甲苯磺丁脲

25g

64-77-7

磺脲剂（SU剂）

99.0+% (Titration)